稳定分泌抗羊种布鲁菌脂多糖单克隆抗体细胞株的筛选-畜牧兽医学报.pdf

畜牧兽医学报 ， （）： ２０１２４３２ ２９０２９８ 　 犃犮狋犪犞犲狋犲狉犻狀犪狉犻犪犲狋犣狅狅狋犲犮犺狀犻犮犪犛犻狀犻犮犪 稳定分泌抗羊种布鲁菌脂多糖单克隆抗体 细胞株的筛选与应用 １ １ １ １ １ １ １ ２ 王 艳 ，王新卫 ，陈 陆 ，赵 军 ，杨 霞 ，王 珊 ，王川庆 ，迪丽拜尔·阿木提 　 　 　 　 　 （ 河南农业大学牧医工程学院动物传染病实验室／禽病研究所，郑州 ； １． ４５０００２ ２．新疆维吾尔自治区阿克苏职业技术学院，阿克苏 ８４３０００） 摘 要：研制抗羊种布鲁菌脂多糖抗原的单克隆抗体，并应用其建立检测布病的双夹心 ＥＬＩＳＡ方法。本研究采用 　 热酚水法提纯羊种布鲁菌（ 菌株）的脂多糖抗原，并经 鉴定。用脂多糖和灭活的羊种布鲁菌 １６Ｍ ＳＤＳＰＡＧＥ １６Ｍ 作为免疫抗原，交替免疫 周龄 ／雌鼠，第 次免疫用羊种布鲁菌标准菌 全菌加等量弗氏完全佐 ６ ８ ＢＡＬＢｃ １ １６Ｍ ～ 剂；第 次免疫用脂多糖加等量弗氏不完全佐剂。将脂多糖作为包被抗原建立间接 方法，筛选针对抗羊种 ２ ＥＬＩＳＡ 布鲁菌（ 菌株）脂多糖的单克隆抗体杂交瘤细胞株。筛选出 株能稳定分泌抗羊种布鲁菌脂多糖单克隆抗体 １６Ｍ ３ 的杂交瘤细胞株，分别命名为 、 和 ，细胞培养上清的 效价在 ，小鼠腹水单 ５Ｈ３６Ｂ８ ３Ｈ７ ＥＬＩＳＡ １∶１０００ １∶５０００ ～ 克隆抗体 效价在 ；抗体亚类鉴定表明： 、 属于 亚类， 属于 亚 ＥＬＩＳＡ １∶１００００ １∶１６００００ ５Ｈ３６Ｂ８ ＩＭ ３Ｈ７ ＩＧ ～ ｇ ｇ３ 类；特异性试验结果显示：株杂交瘤细胞分泌的抗体不与大肠杆菌 裂解抗原、鸡白痢沙门氏菌裂解抗原、鸭 ３ Ｏ１５７ 源鸡杆菌脂多糖抗原以及福氏志贺菌裂解抗原反应，仅与灭活的羊种布鲁菌（ ）发生反应。布鲁菌虎红平板凝 １６Ｍ 集试验和试管凝集试验检测结果显示，获得的单抗可与标准检测抗原形成明显的颗粒凝集物和伞状凝集物。利用 所建立的单克隆抗体细胞株，建立了一种检测布鲁菌的双夹心间接 ＥＬＩＳＡ方法，并进行了特异性和敏感性检测。 对模拟样品和临床样品进行检测，准确性均很高。 关键词：羊布鲁菌；脂多糖抗原；酶联免疫吸附试验；单克隆抗体；杂交瘤细胞 中图分类号： 文献标识码：