药用基础化学 第二版课件 教学课件 ppt 作者 戴静波 主编 第八章 光谱分析法分光光度法.ppt

例1 现测得氯霉素(M：323.15g／mo1)的水溶液在278nm处有最大吸收，设用纯品配制100ml含氯霉素2.00mg的溶液，用lcm的吸收池，在278nm处测得吸光度为0.614，试求其ε。 例2 有一浓度为10μg／ml的Fe2+溶液，以邻二氮菲显色后，在波长510nm处，用厚度为2cm的吸收池，测得吸光度A为0.380，计算(1)透光度T；(2)百分吸光系数；(3)摩尔吸光系数ε。 * 即对同一溶液，用多种单色光作入射光分别测定这一溶液的吸光度。 max为物质分子中的电子，选择吸收了一定波长的光子，发生电子跃迁引起的。 * * * * 续前 1．对比吸收光谱的一致性 同一测定条件下， 与标准对照物谱图或标准谱图 进行对照比较 续前 2．对比吸收光谱的特征值 续前 3．对比吸光度或吸光系数的比值： 例： 二、定量分析 （一）单组分的定量方法 1．吸光系数法 2．标准曲线法 3．对照法：外标一点法 续前 1．吸光系数法（绝对法） 在没有标准品可供比较测定的条件下，按文献规定条件测定被测物的吸光度，从样品的配制浓度、测定的吸光度及文献查出的吸光系数即可计算样品的含量. 练习 例：维生素B12 的水溶液在361nm处的百分吸光系数为207，用1cm比色池测得某维生素B12溶液的吸光度是0.414，求该溶液的浓度 解： 练习 例：称取B12样品25.0mg，用水溶液配成100ml。精密吸取10.00ml，又置100ml容量瓶中，加水至刻度。取此溶液在1cm的吸收池中，于361nm处测定吸光度为0.507，求B12的百分含量？ 解： 练习 例： 解： 续前 2．标准曲线法 标准工作曲线法 先配制一系列标准溶液，在最大吸收波长处，测出它们的吸光度，作图，同条件测未知液的吸光度，从图中查出未知液的浓度 c A 标准工作曲线图 Ax cx c1 c2 c3 c4 c5 A1 A2 A3 A4 A5 示例 芦丁含量测定 0.710mg/25mL 绘制标准曲线应注意以下几点： （1）按选定浓度，配制一系列不同浓度的标准溶液时，浓度范围应包括未知试样浓度的可能变化范围，一般至少应作四个点。 （2）测定时每一浓度至少应同时作两管（平行管），同一浓度平行管测定得到的吸光度值相差不大时，取其平均值 管测定得到的吸光度值相差不大时，取其平均值 （3）用坐标纸绘制标准曲线。也可用最小二乘法处理，由一系列的吸光度-浓度数据求出回归方程。 （4）绘制完标准曲线后应注明测定波长、吸收池厚度、时间等。 微量铁的测定 氨基酸的测定 邻二氮菲法 茚三酮法(紫色化合物) 蛋白质的测定 考马斯亮蓝法 总磷的测定 海水中营养盐的测定 磷钼蓝法 单组分的测定 优点:标准曲线法对仪器的要求不高，是吸收光谱中简单易行的方法。此法在大量样品分析时显得尤其方便，在测定条件固定的情况下，标准曲线可以反复使用。 缺点:但仪器搬动或经维修后应重新校正波长、更换新仪器、试剂重新配制、测定时温度改变较大等条件发生变化时，标准曲线就必须重新绘制。 3、标准对照法——根据 Lambert- Beer Law，以该物质吸收光谱图中的?max为入射光， 首先配制一个与被测溶液浓度相近的标准溶液cS，测其AS， 再将样品溶液推入光路，测其AX，则试样溶液的浓度cX为： 此法适于非经常性的分析工作，准确度不如标 准曲线法。 续前 对照法：外标一点法 注：当样品溶液与标准品溶液的 稀释倍数相同时 练习 解： 1）对照法 例题： 维生素B12的含量测定 精密吸取B12注射液2.50mL，加水稀释至10.00mL；另配制对照液，精密称定对照品25.00mg，加水稀释至1000mL。在361nm处，用1cm吸收池，分别测定吸光度为0.508和0.518，求B12注射液注射液的浓度以及标示量的百分含量（该B12注射液的标示量为100μg / mL） 练习 2）吸光系数法 练习 1．取咖啡酸，在165℃干燥至恒重，精密称取10.00mg，加少量 乙醇溶解，转移至200mL容量瓶中，加水至刻度线，取此溶 液5.00mL，置于50mL容量瓶中，加6mol/L的HCL 4mL，加 水至刻度线。取此溶液于1cm比色池中，在323nm处测定吸 光度为0.463，已知该波长处的 ，求咖啡酸百分 含量 练习 解： 2．精密称取0.0500g样品，置于250mL容量瓶中，加入 0.02mol/L HCL溶解，稀释至刻度。准确吸取2mL，稀释至 100mL。以0.02mol/L HCL为空白,在263