细胞培养技术 教学课件 ppt 作者 兰容 周珍辉 主编 章静波 主审 实验部分3细胞培养用品的清洗 包装和消毒.pptVIP

实验三 细胞培养用品的清洗、包装和消毒 一、实验目的 1.掌握细胞培养常用实验器材的清洗要领、清洗步骤和注意事项。 2.掌握细胞培养常用器材的包装要领和要求。 3.掌握除菌滤器的安装、使用和拆除方法及操作注意事项。 ? 二、实验原理 离体条件下，有害物质直接同细胞接触，细胞对任何有害物质十分敏感，极少残留物都可以对细胞产生毒副作用。因此，新的或重新使用的器皿都必须认真清洗，达到不含任何残留物的要求。 三、器材 三、器材 2.金属器械： 三、器材 3.橡胶、塑料制品： 三、器材 4.其它： 5mL一次性注射器（5） 金属饭盒（1） 记号笔 纱布 剪刀 棉花 棉绳 牛皮纸 铝箔 ? 四、试剂和材料 5％盐酸 清洁液（酸液） 0.5mol/L NaOH 0.5mol/L HCl 三蒸水 75％酒精 五、操作 （一）玻璃器皿的清洗、包装和消毒 1．玻璃器皿的清洗 一般经过浸泡、刷洗、浸酸、和清洗四个步骤。 1）浸泡 新的或用过的玻璃器皿都要先用清水浸泡，软化和溶解附着物。新玻璃器皿使用前得先用自来水简单刷洗，晾干或烘干（50℃）后用5％盐酸浸泡过夜，然后用自来水反复振荡冲洗后备刷洗；用过的玻璃器皿用后应立即浸入清水中备刷洗。 2）刷洗 将浸泡后的玻璃器皿放到洗涤剂水中，用软毛刷反复刷洗。不要留死角，并防止破坏器皿表面的光洁度。将刷洗干净的玻璃器皿洗净、晾干或烘干（50℃），备浸酸。 3）浸酸 浸酸是将上述器皿浸泡到清洁液中，又称酸液，通过酸液的强氧化作用清除器皿表面的可能残留物质。浸酸不应少于六小时，一般过夜或更长。浸酸时放取器皿要小心。 4）冲洗 刷洗和浸酸后的器皿都必须用水充分冲洗，浸酸后器皿是否冲洗的干净，直接影响到细胞培养的成败。手工洗涤浸酸后的器皿，每件器皿至少要反复“注水－倒空”15次以上，最后用三蒸水浸洗2－3次，晾干或烘干（50℃）后备包装用。 2．玻璃器皿的包装 包装材料常用牛皮纸、硫酸纸、棉布、铝饭盒、较大培养皿、铝箔等。小的培养器皿用牛皮纸包装后再装入饭盒内，较大的器皿可以进行局部包扎。 3．玻璃器皿的消毒 玻璃器皿的消毒可以用高温湿热灭菌（20－30min）和高温干热消毒（160℃保持90－120分钟）。 （二）橡胶制品的清洗、包装与消毒 1．橡胶制品的清洗 橡胶制品洗涤方法：浸泡后，2% NaOH煮沸15分钟，流水冲洗，1% HCl煮沸15分钟(或浸泡30分钟)，流水冲洗，蒸馏水煮沸20分钟，三蒸水浸洗2-3次，晾干或50℃烘干备用。 2．橡胶制品的包装 细胞培养用的橡胶制品一般较小，用牛皮纸包装后再装入饭盒内。 3．橡胶制品的消毒 高温湿热灭菌。 （三）塑料制品的清洗、包装与消毒 1．塑料制品的清洗塑料制品质软、易出现划痕；耐腐蚀能力强、但不耐热。其清洗程序：使用器皿后立即用清水清洗，浸于自来水过夜，用纱布或棉签和50℃稀洗液刷洗，流水冲洗（15－20遍），晾干，浸于清洁液15分钟，流水冲洗（15－20遍）,蒸馏水浸洗三次，三蒸水泡24小时，晾干或50℃烘干备用。 2．塑料制品的包装 细胞培养用的塑料制品一般较小，用牛皮纸包装后再装入饭盒内。 3．塑料制品的消毒 高温湿热灭菌。 （四）金属器械的清洗、包装与消毒 1．金属器械的清洗 放到含洗涤剂的水中，反复刷洗后，自来水反复冲洗干净，晾干，用75％酒精擦拭，自来水反复冲洗干净，最后三蒸水浸洗3次，晾干或50℃烘干备用。 2．金属器械的包装 较小的金属器械用牛皮纸包装后再装入饭盒内。 3．金属器械的消毒 金属器械的消毒可以用高温湿热灭菌（20～30min）和高温干热消毒（160℃保持90－120分钟）。 （五）正压除菌滤器的清洗、包装与消毒 1．正压除菌滤器的清洗 放到含稀洗涤剂的水中，反复刷洗后，流水冲洗15min，漓水，蒸馏水浸泡24h，三蒸水浸泡24h，晾干或50℃烘干备用。 2．正压除菌滤器的包装 在包装前应将滤膜装好（滤膜在使用前需经三蒸水浸泡过夜，安装时使用两层0.22μm的滤膜，光面朝上），然后用铝箔或牛皮纸包好正压除菌滤器的出液口和进气口，再用棉布将整个正压除菌滤器团团裹住，并捆好。 3．正压除菌滤器的消毒 121℃高压湿热灭菌20min。 （六）针头滤器的清洗、包装与消毒 针头滤器的清洗、包装与消毒同塑料制品，但是包装前应将滤膜装好，安装滤膜的注意事项和要领同正压过滤器。 * * 微生物污染是造成细胞培养失败的主要原因，因此细胞培养用品在培养细胞前，要消毒或灭菌。对细胞培养用品进行消毒前，要进行严密包装，以便于消毒和贮存。 100mL烧杯（1） 离心管（2） 50或100mL玻璃注射