细胞培养技术 教学课件 ppt 作者 兰容 周珍辉 主编 章静波 主审 实验部分8植物组织培养培养基的配制.pptVIP

实验八 植物组织培养培养基的配制 一、实验目的 掌握植物组织培养培养基的配制方法和操作 二、实验原理 配制植物组织培养的培养基最方便的方法是预先配制不同组分(大量元素、微量元素、铁盐、有机物质、激素)的培养基母液，贮藏在冰箱，待配制培养基时取出，按比例稀释。 配制母液时为了减少工作量可以把几种药品配在同一母液中，但是应该注意各种化合物的组合以及加入的前后顺序，因为一些离子之间易发生沉淀，如Ca2+和S042+，Ca2+、Mg2+和PO43- 一起溶解后，会产生沉淀。一定要把每种试剂单独、充分溶解后再按次序放入母液中。 三、器材 高压蒸汽灭菌锅 250ml三角瓶（4个/组） 牛皮纸 pH试纸（5.4-7.0） 牛皮筋 电子天平 试剂瓶 线绳 PH计 烧杯（50、100、500、1000 m1） 四、试剂和材料 1N 盐酸 1N NaOH 琼脂 蔗糖 其它药品见表MS培养基母液的配制 2,4-D ? 五、操作 1、MS培养基母液的配制： 按照表（见讲义）中数据分别配制大量元素、微量元素、铁盐、有机物质的母液，并在4℃冰箱中保存。 铁盐的配制：在装有800ml蒸馏水的烧杯中加入4粒苛性钠，溶解后加入7.46g Na2EDTA·2H2O，加热使其全部溶解，然后边搅拌边慢慢加入5.56g FeSO4·7H2O直至全部溶解，冷却后定容至1000ml，置于冰箱中备用。 2、植物激素母液的配制： 1mg/ml的2,4-D溶液：取100mg的2,4-D，加入少量95%的酒精和1 N的NaOH溶解，再加蒸馏水定容至100ml。 3、MS基本培养基的配制： 分别吸取MS贮备液：50.0ml大量元素、5.0ml微量元素、5.0ml铁盐、5.0ml有机物质, 加入1L的搪瓷缸或烧杯中中，然后称取蔗糖30.0g, 加入琼脂8g，加蒸馏水约920ml，在电炉上加热，煮沸，融化琼脂，然后加水至950ml。（琼脂也可熬化后再加入）。 4、含2mg/L 2,4-D MS培养基的配制： 吸取2,4-D母液2.0mL加入到MS基本培养基中，搅拌均匀后，用5%的NaOH调节pH至5.8（大概8滴）。加水定容至1000ml。 5、分装： 将配制好的培养基分装于250ml三角瓶中，每瓶装100mL，盖上封口膜或棉塞，并用牛皮纸包扎。 6、培养基的灭菌 121度，20分钟 六、注意事项 1、配制贮存母液时，要算好各种成分逐次加入，等第一种成分完全溶解后再加入第二种成分，切忌“一锅煮”。有机物质配好以后要装入棕色瓶放入电冰箱内保存，其它三种母液可在常温下保存但最多不能超过一个月。 2、pH值对培养基的硬度有影响，pH过高培养基变硬，pH过低培养基不能凝固，所以要调整好培养基的pH值。 七、结果与讨论 评价培养基的配制效果（是否无菌，培养基的硬度情况） * *