细胞培养技术 教学课件 ppt 作者 兰容 周珍辉 主编 章静波 主审 实验部分9 植物愈伤组织培养.pptVIP

实验九 植物愈伤组织培养 一、实验目的 1、练习并掌握植物组织培养的无菌操作。 2、掌握植物愈伤组织培养技术。 二、实验原理 植物愈伤组织的培养是指将母体植株上的各个部分切下，形成外植体，接种到无菌的培养基上，进行愈伤组织诱导、生长和发育的一门技术，由外植体形成愈伤组织标准着植物组织培养的开始，一般情况下，植物各器官和组织均有诱导产生愈伤组织的潜在可能性。 三、器材 蒸汽灭菌锅 酒精灯 搪瓷盘 剪刀 培养皿 滤纸 250ml烧杯 超净工作台 解剖刀柄与刀片 长镊子 脱脂棉 50ml烧杯(2) 四、试剂和材料 l.5％次氯酸钠 75%酒精 0.2％的升汞溶液 胡萝卜或白菜的胚 0.01%吐温20 70％酒精 含2mg／L 2，4－D的MS固体培养基 五、操作 （一）胡萝卜愈伤组织培养 1. 取两个50ml的小烧杯,分别倒入25ml的70%的酒精和0.2%的升汞。 2. 取胡萝卜贮藏根，洗净，然后将胡萝卜根于70％酒精中浸泡数秒钟。 3. 浸于0.2％氯化汞（升汞）液中消毒灭菌10 min后,再用无菌水冲洗3—4次。 4. 将灭菌材料放在灭菌的滤纸上,吸干水分。 5. 用解剖刀将胡萝卜切去表皮和中柱，取皮层，切成0.5cm见方的小块，接种于MS附加 2.0mg/L 2，4-D 培养基内,于 25℃，黑暗或漫射光下培养,14—21 天后继代一次。 （二）白菜成熟胚组织培养 1. 取成熟种子，用70％乙醇浸l min，转至l.5％次氯酸钠溶液（ 含有0.01%吐温20）浸泡l.5—2 h后，用无菌水冲洗4～5次，置无菌滤纸上吸干多余水分。 2. 将成熟胚置于含 2mg／L 2，4－D的MS固体培养基上，27℃暗培养诱导愈伤组织 10天后（成熟胚）继代一次。 六、注意事项 1、外植体不能太小，否则会影响愈伤组织的形成。 2、实验所使用的器材要严格灭菌，注意无菌操作，避免因染菌导致实验失败。 3、材料脱毒时不要在酒精中停留过长时间，以免材料被杀死。 七、结果与讨论 1、外植体经过20天的培养后，长出淡黄色的愈伤组织。 2、写出本次实验个人操作体会。 * *