细菌的革兰氏染色实验性质-验证实验类别-本科基础实验实验学时-2实验教师-陈兴都.pptVIP

细菌的革兰氏染色 实验性质：验证 实验类别：本科基础实验 实验学时：2 实验教师：陈兴都 一、实验目的及实验原理 实验目的 掌握细菌的涂片及染色的基本方法和步骤。 实验原理 革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G-）两大类，是细菌学上最常用的鉴别染色法。G-菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经蕃红复染后就成红色。G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色。 二、实验器材 菌种 枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌。 染色液和试剂 结晶紫、卢哥氏碘液、95%酒精、蕃红、二甲苯、香柏油。 器材 载玻片、接种杯、酒精灯、擦镜纸、显微镜、显微摄像系统。 三、实验方法 革兰氏染色操作步骤： （1）涂片晾干固定。 （2）结晶紫色初染：滴加适量（以盖满细菌涂面）的结晶 紫染色液染色1～2分钟，水洗。 （3）碘液媒染：滴加卢哥氏碘液，媒染1min，水洗。 （4）脱色：将玻片倾斜，连续滴加95%乙醇脱色15s至 流出液无色，立即水洗。 （5）复染：滴加蕃红复染2min，水洗。 （6）晾干镜检。 革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。如脱色过度，革 兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌。 四、实验报告 1.实验结果 分别绘出你在油镜下观察到的微生物形态图，并注明该菌的革兰氏染色的反应性。 2.分析与讨论 对实验结果与存在的问题进行总结与简要分析。 * *