细胞培养技术 教学课件 ppt 作者 兰容 周珍辉 主编 章静波 主审 理论部分2动物细胞培养的基本知识.pptVIP

第二章 动物细胞培养的基本知识 一、培养细胞的特性 贴附生长： 必须贴附于支持物表面才能生长(这种细胞称为贴壁依赖性细胞)。大多数细胞是这种生长方式。 这类细胞存在接触抑止和密度依赖性的生长特性。 悬浮生长： 于悬浮状态下即可生长，不需要贴附于支持物表面(这种细胞称为非贴壁依赖性细胞) 。如某些癌细胞和血液白细胞。细胞悬浮生长时胞体为圆形。这类细胞容易大量繁殖。 2、培养细胞的类型 贴附生长的细胞，大多只附着一个平面，因而培养细胞的外形一般与体内明显不同。 按照培养细胞的形态，主要可分为以下四种类型： 成纤维细胞型： 上皮细胞型： 游走细胞型： 多型细胞型： 3、培养细胞的生长过程 原代培养期：也称初代培养，即从体内取出组织接种培养到第一次传代阶段，一般持续1一4周。此期细胞呈活跃的移动，可见细胞分裂，但不旺盛。 传代期：初代培养细胞一经传代后便改称做细胞系（Cell Line）。在全生命期中此期的持续时间最长。在培养条件较好情况下，细胞增殖旺盛，一般情况下当传代10～50次左右，细胞增殖逐渐缓慢，以至完全停止，细胞进入衰退期。 衰退期：此期细胞仍然生存，但增殖很慢或不增殖；细胞形态轮廓增强，最后衰退凋亡。 在细胞生命期阶段，少数情况下，由于某种因素的影响，细胞可能发生自发转化。转化的标志之一是细胞可能获得永生性，细胞永生性也称不死性，即细胞获持久性增殖能力，这样的细胞群体称无限细胞系，也称连续细胞系。无限细胞系的形成主要发生在第二期末，或第三期初阶段。细胞转化亦可用人工方法诱发。  2）每代贴附生长细胞的生长过程 游离期：细胞接种后在培养液中呈悬浮 状态．也称悬浮期。此时细胞质回缩，胞体呈圆球形。一般 10分钟一4小时。 贴壁期：贴附底物,一般24小时内贴壁。 潜伏期：此时细胞有生长活动，而无细胞分裂。细胞株潜伏期一般为6～24小时。 对数生长期：细胞数随时间变化成倍增长，活力最佳，最适合进行实验研究。 停止期（平台期）：细胞长满瓶壁后，细胞虽有活力但不再分裂 机制：接触抑制、密度依赖性 二、培养细胞的生长条件 1 、细胞的营养需要:广泛使用添加血清的人工合成培养基 2、 细胞的生存环境 水：新鲜三蒸水 温度: 37 ℃ 气体条件： 含5% CO2的无菌空气 Na HCO3 +H2O ← → Na + + HCO3- +H2O ← → Na + + H2CO3 + OH- ← → Na + + OH- + CO2 + H2O pH: 7.2-7.4(通过在培养液中添加Na HCO3和HEPES来实现) 渗透压：260－320mmol/L（通过在培养液中添加多种无机盐、碳水化合物来实现） 3、无毒、无污染 三、动物细胞培养的常用设备和工具 压力蒸汽消毒器：湿热消毒，用途广 电热干燥箱：干热消毒（160℃ ，2小时）。主要用干玻璃器皿消毒 紫外灯 ：紫外线消毒。 主要用于培养室空气、操作台、塑料养皿和培养板等表面消毒 超净台 滤 器 CO2培养箱 倒置显微镜 自动双重纯水蒸馏器 思考题： 体外培养细胞有哪些生长方式？ 体外培养细胞的生命期可分为哪三个阶段？ 体外培养细胞的一代生长过程可人为的分为哪几期？ 动物细胞培养的关键条件包括哪些？ * * 1、培养细胞的生长方式 不常见（P89） 常见 此细胞形态与体内成纤维细胞的相似而得名，胞体呈梭形或不规则三角形，中央有卵圆形核，胞质向外伸出２～３个长短不齐的突起。成群细胞呈放射状、旋涡状等形式，除真正的成纤维细胞外，凡由中胚层间充质起源的组织，如心肌、平滑肌、成骨细胞、血管内皮等细胞常呈此形态。 本型细胞呈扁平、不规则多角形，中有圆形核。细胞彼此紧密相连成单层膜，因为相互拥挤而呈现“铺路石”状，很少脱离细胞群单独活动；起源于内、外胚层细胞如皮肤表层、消化层上皮、肝、胰、肺泡上皮等皆呈上皮型形态。 1）培养细胞的生命期 所谓培养细胞的生命期，是指细胞在培养中持续 增殖和生长的时间。大致可分为以下三个阶段： 细胞贴壁后由圆形细胞变成放射延展细胞，进而 过渡成极性细胞。 培养细胞一代生长过程 超净工作台的工作原理是利用鼓风机驱动空气通过高效滤器除去空气中的尘埃颗粒，使空气得到净化。净化空气徐徐通过工作台面，使工作台内构成无菌环境。 过滤除菌：大多数培养用液，如人工合成培养基、血清、 酶液等均采用滤过法除菌 。 CO2培养箱设定的条件为37 ℃ ，5％CO2 。 使用CO2培养箱培养细胞时应注意的问题： ①用螺旋口瓶培养细胞时，需将瓶盖微松，以