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流式细胞仪分析测试中心 刘萍 2015.11.20 汇 报 内 容讲座内容仪器构造和原理仪器应用领域 样品准备 什么是流式？ 流式细胞术（Flow Cytometry)是一种可以快速、准确地检测直线流动状态中单个微粒的 多项物理及生物学特性并加以定量分析的技术，同时可以对特定群体进行分选。仪器结构 数据处理 系统液流系统光学系统鞘液流样品流激光器滤光片仪器结构laserNozzleLaserSample Sheath液流系统 液流车光路系统荧光散射光人外周血流式细胞仪双参数散点图荧光信号染料荧光：外源染料经激光照射后发出荧光， 如FITC, PI等。自发荧光：样品自身内的物质经激光照射后发出的荧光，如藻类的叶绿体，GFP等。荧光信号FL-1 直方图 散点图荧光信号的强弱，反映了目标检测物的含量多少十字象限区分单阳，双阳区分选分选原理+-+ 流式细胞仪的应用举例abc1、药理毒理研究 细胞内 ROS ,pH值，膜电位等生理指标的变化a- 对照组b-低剂量组c-高剂量组ROS检测结果2、血细胞分型研究?艾滋病检测：患者CD4/CD8降低3、细胞周期和细胞凋亡研究G0/G1ApotosisSG2/MPI 单染 双染4、微生物、藻类及血细胞分群研究海水微型生物分群血细胞分群5、藻类，细菌，血细胞等计数研究临床血液分析计数白细胞，淋巴细胞等含量绝对计数：相对计数：药物作用后各组细胞数量的相对变化6、细胞群体单路、多路分选，单细胞分选 样 品 准 备样品准备1、样品荧光染料染色 （藻类样品含有自发荧光）1） BD 流式细胞仪Aria I 激光器488nm和633nm，荧光染料有多种，选择时要注意染料的最大激发波长选在488或633附近的以保证荧光强度。2）多种染料染色时尽量选择光谱距离远的染料样品准备3）样品绝对计数准备Trucount 计数微球4）PI等有毒的荧光染料注意自身防护，不要污染操作区域。样品准备2、样品浓度 动植物细胞，培养的细菌，藻类浓度控制在10 5/mL,样品浓度过大会出现相反的结果。样品体积500uL左右 。（海水样品分析直接上样）随机收集10000-20000个微粒3、样品过虑 喷嘴 70 μm, 100 μm，所有样品上机前过300目筛网Thanks For Your Attention !