工业微生物 教学课件 ppt 作者 周凤霞 高兴盛 主编第四章.ppt

工业微生物 第四章 微生物的生长 第一节 微生物生长的测定 微生物生长情况可以通过测定单位时间里微生物数量或生物量的变化来评价。通过微生物生长的测定可以客观地评价培养条件、营养物质等对微生物生长的影响，或评价不同的抗菌物质对微生物产生抑制（或杀死）作用的效果，或客观反应微生物的生长规律。因此微生物生长的测量在理论上和实践上有着重要的意义。 根据考察的角度、测定的条件和要求不同，可将微生物生长的测量方法分为直接计数法和间接计数法。 第一节 微生物生长的测定 一、直接计数法 （一） 计数器直接计数法 又称全菌计数法，将待测样品适当稀释后，染色，加到血球计数板 ( 适用于细胞个体形态较大的单细胞微生物，如酵母菌等 ) 或细菌计数板 ( 适用于细胞个体形态较小的细菌 ) 上的计数室内，在显微镜下计数一定体积中的平均细胞数，换算出待测样品的细胞数。 这是一种常用的方法，快速、简便，所得结果是死菌和活菌的总数（图 4-1）。 第一节 微生物生长的测定 第一节 微生物生长的测定 （二） 比浊法 这是测定菌悬液中细胞数量的快速方法。其原理是菌悬液中的单细胞微生物的细胞浓度与混浊度成正比，与透光度成反比。细胞越多，浊度越大，透光量越少。因此，测定菌悬液的光密度 ( 或透光度 ) 或浊度可以反映细胞的浓度。将未知细胞数的悬液与已知细胞数的菌悬液相比，求出未知菌悬液所含的细胞数。浊度计、分光光度计是测定菌悬液细胞浓度的常用仪器。此法比较简便，但使用有局限性。适用于菌悬液浓度在10-7个/mL以上、颜色浅，没有混杂其他物质的样品。 第一节 微生物生长的测定 （三）称重法 这是一种常用的方法，直接称量样品的干重或湿重。一般细菌干重约为湿重的 20％～25％。此法直接而又可靠，但要求测定时菌体浓度较高，样品中不含杂质，对单细胞及多细胞均适用，尤其是测定菌丝体常用的方法。 第一节 微生物生长的测定 （四）菌丝长度测定法 这是针对丝状真菌生长而确定的测定方法，一般在固定培养基上进行。最直接的方法就是将真菌接种到平皿的中央，定时测定菌落的直径或面积。对生长快的真菌，每间隔24h测一次，对生长慢的真菌可以数天测定一次，直到菌落覆盖了整个平皿，据此可以测出菌丝的生长速度。不过这种方法不能反映菌丝的纵向生长，即菌落的厚度和深入培养基的菌丝。另外，接种量也会影响测定结果。 第一节 微生物生长的测定 （五）平板菌落计数 平板菌落计数法可以反映出样品中活菌的数量，又叫活菌计数法。将单细胞微生物待测液经10倍系列稀释后，把最后三个稀释浓度的稀释液各取一定的量接种到琼脂平板培养基上培养，长出的菌落数就是稀释液中含有的活细胞数，据此计算出供测样品中的活细胞数。也可以将经过灭菌后冷却至45~50℃的固体培养基与一定稀释度和体积的菌悬液在培养皿中混匀再倒入培养皿，凝固后培养适当时间，测定菌落形成单位的数目，以此推算出待测样品中的活细胞数。此法要求菌体成分散状态，否则无法确定单个菌落是否由单个细胞形成。因此比较适合于细菌和酵母菌等单细胞微生物计数，不适合于霉菌等多细胞微生物计数。 第一节 微生物生长的测定 （六） 薄膜过滤计数法 测定水与空气中的活菌数量时，由于含菌浓度低，则可先将待测样品 ( 一定体积的水或空气 ) 通过微孔薄膜 ( 如硝化纤维薄膜 ) 过滤浓缩，然后把滤膜放在适当的固体培养基上培养，长出菌落后即可计数。此法适用于测定量大、含菌浓度很低的流体样品，如水、空气等。 第一节 微生物生长的测定 二、间接计数法 （一）测定细胞组分的含量进行估算 1. 含氮量测定法 细胞的蛋白质含量是比较稳定的，可以从蛋白质含量的测定求出细胞物质量。一般细菌的含氮量约为原生质干重14％。而总氮量与细胞蛋白质总含量的关系可用下式计算： 蛋白质总量 = 含氮量百分比× 6.25 第一节 微生物生长的测定 2. DNA 测定法 这种方法是基于 DNA 与 DABA — 2HCl( 即新配制的 20％ W／W ， 3,5 -二氨基苯甲酸—盐酸溶液 ) 结合能显示特殊荧光反应的原理，定量测定培养物的菌悬液的荧光反应强度，求得 DNA 的含量，可以直接反映所含