呼吸道感染教材病原体抗体检测与应用.ppt

呼吸道感染病原体抗体检测及应用 云南昆钢医院检验科 湛成国 一、呼吸道感染概述 二、九项呼吸道感染病原体IgM抗体检测 一、呼吸道感染概述 1.概述 呼吸道感染是指病原体感染人体的鼻腔、咽喉、气管和支气管等呼吸系统。分为上呼吸道感染和下呼吸道感染，上呼吸道感染常见的是急性上呼吸道感染，指鼻腔、咽喉部急性炎症的概称，是呼吸道最常见的一种传染病。常见病因为病毒，少数由细菌引起，患者不分年龄、性别、职业和地区，不仅具有较强的传染性，而且可引起严重并发症。下呼吸道感染是最常见的感染性疾患，包括急性气管支气管炎、慢性支气管炎、肺炎、支气管扩张等，由病毒、细菌、支原体、衣原体、军团菌等微生物引起。其防治应遵循预防为主、准确诊断、及时治疗的原则，治疗时必须明确引起感染的病原体以选择有效的抗生素。 2、临床症状 1）局部症状：鼻塞、流涕、喷嚏、干咳、咽部不适和咽痛等，多于3～4天内自然痊愈。 2）全身症状：发热、烦躁不安、头痛、全身不适、乏力等。部分患者有食欲不振、呕吐、腹泻、腹痛等消化道症状。腹痛多为脐周阵发性疼痛，无压痛，可能为肠痉挛所致；如腹痛持续存在，多为并发急性肠系膜淋巴结炎。 3）婴幼儿起病急，全身症状为主，局部症状较轻。多有发热，体温可高达39～40℃，热程2～3天至1周左右，起病1～2天可因高热引起惊厥。年长儿以局部症状为主，全身症状较轻，可仅轻度发热。 3、非典型呼吸道病原体 呼吸道非典型病原体是指除肺炎双球菌以外的病原体，已报道的非典型呼吸道病原体有很多，最常见的有嗜肺军团菌、肺炎支原体、肺炎衣原体、Q热立克次体、腺病毒、呼吸道合胞病毒、流感病毒、副流感病毒等。 4、非典型呼吸道病原体的检测方法 分子生物学检测：PCR 病原检测：病原体分离培养 血清学检测：ELISA、IFA(间接免疫荧光抗体法) 5、呼吸道传染病的预防措施 避免受凉 净化环境 管理传染源，切断传播途径 补充营养 注意生活规律 加强个人卫生和个人防护 自动免疫 二、九项呼吸道感染病原体IgM抗体检测 目前市场上商品化的呼吸道九联检产品基本都是检测以下九项：嗜肺军团菌、肺炎支原体、Q热立克次体、肺炎衣原体、腺病毒、呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒和副流感病毒（1、2、3型）。 西班牙VIECELL公司出品 安图代理 1.检测样本要求 本试剂盒仅适用于检测人血清。其血液采集需由专业人员无菌静脉穿刺采集。建议使用消毒或无菌技术，以保持样本的完整性。血清样本采集后如不在8小时内检测应2～8 oC冷藏，如7天内不检测，则应冷冻（-20oC）保存。不要反复冻融以防止免疫球蛋白滴度降低，特别是IgM。不要使用高血脂或污染的血清。若样本中含有微粒要离心使之澄清。 2.检测方法原理 间接免疫荧光法（IFA）是基于待测样本中的抗体与吸附在载玻片上的抗原发生的反应。样本中存在的特异性抗体和抗原反应，未与抗原结合的免疫球蛋白在洗涤步骤中除去。在下一步骤中，抗原-抗体复合物与荧光素标记的抗人球蛋白反应，用免疫荧光显微镜观察结果。 3.操作流程 4.显微镜观察 病原体 形态或荧光模式 嗜肺军团菌 杆状 肺炎支原体 细胞外围荧光模式 立克次体 球杆状 肺炎衣原体 球状 腺病毒 混合荧光模式（细胞核和胞浆或胞膜） 呼吸道合胞病毒 混合荧光模式（细胞核和胞浆或胞膜） 甲型流感病毒 混合荧光模式（细胞核和胞浆或胞膜） 乙型流感病毒 混合荧光模式（细胞核和胞浆或胞膜） 副流感病毒 混合荧光模式（细胞核和胞浆或胞膜） 5.结果判读 1）阳性结果：可以观察到腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒或副流感病毒对阳性血清的1-15%细胞的细胞核、胞浆或胞膜出现苹果绿色荧光（在副流感病毒和呼吸道合胞病毒中能同时观察到着色的合胞）；军团菌、衣原体或立克次体中所有的细菌呈现出苹果绿色荧光；支原体对阳性血清在细胞外围呈现苹果绿色荧光。 2）阴性结果：可观察到军团菌、肺炎衣原体和立克次体无荧光，支原体、腺病毒、甲型和乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的细胞呈现红色。 6.注意事项 1）每一次试验都应设立阳性和阴性对照，以确认试验和试剂盒的有效性。观察到的荧光模式应与说明书要求相符合，否则检验无效。 2）洗涤时注意不要直接对着孔直接冲洗，以免冲洗掉已经固化反的应复合物。 3）单一