p53-miR-34a-SIRT1反馈环在血管内皮祖细胞复制性衰老过程中的调控.PDF

496 中国循环杂志 2018 年 5 月 第 33 卷 第 5 期（总第 239 期）Chinese Circulation Journal，May，2018，Vol. 33 No.5（Serial No.239） 基础与实验研究 p53-miR-34a-SIRT1 反馈环在血管内皮祖细胞复制性衰老过程中的 调控作用及机制 宋云林，谭秋婵，马燕，白林林，柴瑞峰，王毅，于湘友 摘要 目的：研究 p53-miR-34a-SIRT1 反馈环在血管内皮祖细胞（EPC）复制性衰老过程中的调控作用及机制。 方法：培养并鉴定由脐带血来源的 EPC；观察第三代和第六代 EPC 在衰老、凋亡、周期和血管形成等方面的差异； 检测第三代和第六代 EPC 中 p53、乙酰化的 p53（Ac-p53）、沉默信息调节因子 2 相关酶１（SIRT1）的表达情况；构建 携带微小核糖核酸（miR）-34a 抑制因子的慢病毒载体，明确外源性 miR-34a 抑制因子能否延缓第六代 EPC 的凋亡。 结果：成功培养了脐带血来源的 EPC。第六代 EPC 的衰老率和凋亡率明显高于第三代 EPC，细胞周期主要停留 在 G0/G1 期；第六代 EPC 的 p53 表达量高于第三代 EPC，Ac-p53 和 SIRT1 表达则相对较低，组间差异均有统计学意 义（P 均 0.05）。转染携带 miR-34a 抑制因子的慢病毒载体后，第六代 EPC 衰老情况有所改善，血管形成能力也增强， 晚期凋亡率明显减少。 结论：p53-miR-34a-SIRT1 是 EPC 复制性衰老过程中的重要反馈调节机制，miR-34a 抑制因子可能是延缓 EPC 衰老的靶点。 关键词 血管内皮祖细胞；细胞衰老；凋亡；肿瘤抑制蛋白质 p53；SIRT1 Modulating Effects and Mechanisms of p53-miR-34a-SIRT1 Feedback Loop on Reproductive Senescence of Vascular Endothelial Progenitor Cells SONG Yun-lin, TAN Qiu-chan, MA Yan, BAI Lin-lin, CHAI Rui-feng, WANG Yi, YU Xiang-you. Department of Critical Care Medicine, The First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University, Urumqi (830054), Xinjiang, China Corresponding Author: YU Xiang-you, Email: yu2796@163.com Abstract Objectives: To explore the modulating effects and related mechanisms of p53-miR-34a-SIRT1 feedback loop in the process of replication senescence of vascular endothelial progenitor cells (EPC). Methods: EPC derived from umbilical cord blood were cultured and identified. Differences on senescence, cell apoptosis, cell cycle and blood tube formation were observed in EPC of 3rd th and 6 generation. Protein expression of p53, Acetyl-p53, and SIRT1 was also detected by Western blotting in EPC of 3rd th