细胞融合和单克隆抗体(修改版)(新人教版选修3).ppt

2.2.2动物细胞融合和单克隆抗体;知识回顾：植物体细胞杂交的过程;物理法： 化学法： 生物法：;用灭活病毒诱导动物细胞融合的过程：;4.动物细胞融合技术的优点：;总结：比较植物体细胞杂交和动物细胞融合; 回 顾 1、抗体的化学本质？ 2、抗体由什么细胞产生？ 3、抗体的作用特点？;1、抗体的传统生产方法;一个B淋巴细胞——只分泌一种特异性抗体 小鼠骨髓瘤细胞——能无限增殖;2、单克隆抗体的制备过程;2、单克隆抗体的制备过程;多种杂交 细胞;单抗的制备过程要点：;（3）整个制备过程为何要经过两次筛选?;1、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合?; ※知识拓展： 如何进行杂交瘤细胞的抗体检测及克隆化培养？ 融合后的细胞经选择性培养基培养后，能存活的细胞就是杂交瘤细胞。但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞，通常用“有限稀释法”来选择。将杂交瘤细胞稀释，用多孔细胞培养板培养，使每孔细胞不超过一个，通过培养让其增殖。然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体（常用酶联免疫吸附试验法），那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀释，一般需进行3～4次，直至确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞。该过程即为杂交瘤细胞的克隆化培养。;单克隆抗体： 特异性强、纯度高、灵敏度高， 产量大、容易标准化生产。;4、单克隆抗体的应用;小结;细胞工程; 练习 （1）在用动物细胞融合技术制备单克隆抗体时， 将抗原注射到小鼠体内，可获得(多选) （ ） A．T淋巴细胞 B．效应B淋巴细胞 C．抗体 D．记忆细胞 （2）下列关于单克隆抗体的制备和应用的叙述中， 正确的是 (多选) （ ） A．B淋巴细胞与骨髓瘤细胞的融合，一般需要灭活的仙台 病毒或聚乙二醇诱导 B．融合后形成的杂交瘤细胞既能无限增殖，又能产生单克 隆抗体 C．体外培养时，一个B淋巴细胞可以产生一种抗体，但不 能无限增殖 D．单克隆抗体与常规抗体相比，特异性强，灵敏度高， 优越性明显;例题1： 1975年，英国剑桥大学分子生物学实验室的科勒和米尔斯坦，把小鼠的淋巴细胞（脾细胞）和小鼠的骨髓瘤细胞融合起来，成为杂交瘤细胞，实现在体外大量生产抗体的目的。实验过程如图所示。; [变式练习] 右图为细胞融合的简略过程，请据图回答： ⑴ 若A、B是植物细胞，在细胞融合之前已 用 处理，除去了 ； A、B到细胞C的过程中，常用的物理方法 是 。 ⑵ 若A、B是植物细胞，则形成的D细胞还要应 用 技术把 D 培养成植株。 ⑶ 若A、B是动物细胞，一般取自 ， 然后用 ，使其分散开来， A、B到 C 的过程中，常用的不同于植物细胞的手 段是 ，所形成的D称为 。 ⑷ 若该过程是制备单克隆抗体，A为小鼠，那么， 在获得此细胞之前，小鼠已被注射了 。 注射后小鼠身体产生了相应的 。图中B为 。 ⑸ 若该过程仍是制备单克隆抗体，在A、B到C的过程中，所形成的 C 有 种，用来培养的D细胞应该是 。从中选择出它的方法是 培养。获得D后，常用的培养方法是 。;已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S途径，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在试管中混合，加聚乙二醇促融，获得杂种细胞。请回答： （1）试管中除融合的杂种细胞外，还有 种融合细胞。 （2）设计一方法（不考虑机械方法），从培养液中分离出 杂种细胞，并说原理。 方法： 。 原理：