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果蔬营养含量的测定 学院：农学院 专业：植物保护 班级：植保1001 姓名：XXX 学号：XXXXXXX 同组人：XXX 摘要： 果蔬中含有大量的营养物质，如蛋白质，还原糖，维生素C含量等等，通过对其进行营养测定，可以了解到这些营养物质的含量。 3,5-二硝基水杨酸(DNS)比色法是还原糖测定的一种常用方法。该方法具有简便、快速、灵敏度高等特点。 秦永惠等[1]采用 2 ,6-D二氯靛酚钠动力学分光光度法测定了西红柿及草莓中的抗坏血酸 ,提出用 2 ,6-D二氯靛酚钠作氧化剂 ,与抗坏血酸混合 ,在固定时间间隔于 611 nm 处测得吸光度 A 值的变化(ΔA/Δt)与维生素 C含量成线性关系. 线性范围为 0 mg/L12 mg/L ,在样品处理时采用偏磷酸作为提取剂 ,以减缓 Vc 被氧化的速度. 该法灵敏度高 ,操作简便 ,试剂易得 ,容易推广。 本文介绍了用这几种方法分别对青椒、马铃薯的维生素C、还原糖以及淀粉酶活力进行了实验，得出了相关数据。 关键词： 淀粉酶活力 还原糖 维生素C 原理： 淀粉酶的活力大小和产生的还原糖的量成正比。用比色法测定还原糖（麦芽糖）的量，以单位重量样品在一定时间内生成的麦芽糖的量表示酶活力。由于两种淀粉酶特性不同，α-淀粉酶不耐酸，在pH3.6以下迅速钝化，β-淀粉酶不耐热，在70℃15min钝化。根据它们的这种特性，在测定活力时钝化其中之一，就可测出另一种淀粉酶的活力。在非钝化条件下测定淀粉酶总活力。淀粉酶水解淀粉产物遇碘呈现不同的颜色、温度、pH或激活剂，抑制剂对淀粉酶活性影响程度不同，故可由酶反应产物遇碘呈现的颜色判断上述诸因素对酶活性影响。在温度低和较高时，淀粉酶活性丧失，而在40℃左右酶活性很高。过酸或过碱环境使酶失活，在pH5.6（接近中性）淀粉酶活性较高。酶抑制剂使酶活性降低甚至丧失，酶激活剂使酶活性升高。 天然维生素C分还原型和脱氧化型两种，还原型抗坏血酸在中性和微酸性的条件下能把蓝色染料2 ,6-D二氯靛酚钠（2.6-D)还原成无色化合物，而本身氯化脱氢抗坏血酸。2，6-D钠盐溶于水，其碱性或中性水溶液呈蓝色，在酸性溶液呈桃红色，这个变化为滴定种点。 DNS法测定原理为3，5．二硝基水杨酸与多糖水解产物还原糖共热后生成棕红色的氨基化合物(3一氨基-5-硝基水杨酸)，在一定的范围内，还原糖的含量和反应液颜色成比例关系，利用比色法可测定多糖的含量。DNS比色法中．色素等还原性物质可与DNS显色剂显色，采用水解前测定值校正水解后测定值的方法，简便、有效地排除了色素等杂质的干扰。 一 材料与方法 1.1 材料与仪器 萌发的小麦种子；标准麦芽糖溶液，3,5-二硝基水杨酸；硫酸铜溶液、氯化钠溶液、硫酸钠溶液、淀粉溶液、碘液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液 电子天平、离心机、离心管、研钵、容量瓶50ml*1 100ml*2、恒温水浴、刻度试管、刻度吸管、分光光度计、冰箱 1.2 方法 1.2.1淀粉酶活力的测定 1．麦芽糖标准曲线的测定 绘制标准曲线，麦芽糖含量（mg）横坐标，光密度纵坐标 2．淀粉酶液的制备 称2g萌发的小麦种子于研钵，加少量石英砂和2ml蒸馏水研磨匀浆，转移至离心管中，用6ml蒸馏水分次将残渣洗入离心管，提取液在室温下静置提取15-20分钟，每隔数分钟搅动1次，充分提取。在4000r∕min转速下离心10分钟。将上清液倒入50ml容量瓶定容，摇匀，即为淀粉酶原液，用于α-淀粉酶活力测定。吸取上述淀粉酶原液2ml放入50ml容量瓶，定容，为淀粉酶稀释液用于淀粉酶总活力的测定。 3．酶活力的测定 6支试管，编号，按表添加 将试管混匀，分别取2ml，放入25ml刻度试管中，再加入2mlDNS试剂混匀，置沸水浴中加热5min，取出冷却，用蒸馏水稀释至25ml混匀，在分光光度计540nm处进行比色，测定光密度，记录测定结果。 二 结果和分析 ㈠实验结果 ①α-淀粉酶活性=（A-A’）*样品稀释倍数*定容体积／（样品重*c） 根据麦芽糖理想曲线A＇0=0.584mg A=0.896mg α-淀粉酶活性=(0.896-0.584)*8*50／(2*1)=62.4mg／(g·5min) ②总淀粉酶活力 比色后数据为B＇0=0.0022 B2=0.109 B3=0.112 B=（B2+ B3）／2=0. 1105 根据麦芽糖理想曲线B＇0=0.076mgB=0.356mg （α+β）淀粉酶活性=（0.356-0.076）*8*50*25／(2*1)=1400 mg／(g·5min) ③β—淀粉酶活性 β—淀粉酶活性=（α+β）—淀粉酶活性-α—淀粉酶活性 β—淀粉酶活性=1400-62.4=1337.