槲皮素与蛋白质作用的荧光法研究.doc

PAGE 槲皮素与荧光活性氨基酸的相互作用研究 陈代武 （邵阳医学高等专科学校药学系，湖南 邵阳，422000） 摘要： 采用荧光光谱法，研究荧光活性物质槲皮素（Qct）与色氨酸（Trp）、酪氨酸（Tyr）和苯丙氨酸（Phe） 的相互作用。在pH7.4的磷酸缓冲溶液（PBS）中，测得不同温度下的反应平衡常数（K）和结合摩尔比（n），槲皮素与氨基酸间有较强的结合作用，求出了结合的热力学常数。 关键词： 槲皮素；氨基酸；荧光法研究分子间相互作用 中图分类号：O655 文献标识码：A Fluorescent Studies on the Interactions of Quercetin with Aminophenol CHEN Dai-wu （Department of Pharmaceutical and Shaoyang medical college, Shaoyang, Hunan 422000） Abstract To study the interaction between quercetin (Qct) with tryptophan（Try）Tyrosine, (Tyr) and phenylalanine(Phe) by Fluorescence spectroscopy . In 0.1 mol L-1 phosphate buffer solution (PBS, pH 7.4), The binding constants K and binding site n at different temperature were determined, The interaction between Qct and three aminophenol seems to be strong . Key words quercetin(Qct); tryptophan(Try); Tyrosine(Tyr); phenylalanine(Phe); fluorescent studies on intermolecular interactions 氨基酸是在生物体内构成蛋白质分子的基本单位，与生物的生命活动有着密 【作者简介】： 陈代武(1968-) ,男, 副教授，研究方向: 生命科学中的新分析方法切的关系。它在抗体内具有特殊的生理功能，如果人体缺乏任何一种氨基酸，就可导致生理功能异常，影响抗体代谢的正常进行，最后导致疾病或引起代谢障碍 【作者简介】： 陈代武(1968-) ,男, 副教授，研究方向: 生命科学中的新分析方法 槲皮素（Quercetin，简称Qct，图示1）是一种黄酮类天然抗氧化剂[1-2]，广泛存在于植物（含食用植物）中，其抑菌抗炎、防止血小板凝聚和防治心血管疾病及化学物质诱导肿瘤等药理作用正日益受到人们的关注[3-5]。生物医学中槲皮素与蛋白质作用的研究较多,而与具有荧光的氨基酸作用的未见文献报道，本文采用荧光分析法研究了荧光活性物质Qct与色氨酸（tryptophan,Try）、酪氨酸(Tyrosine, Tyr)及苯丙氨酸(phenylalanine, Phe)的作用，从Qct与游离的氨基酸分子和蛋白质分子中的氨基酸的作用比较，了解Qct与生物大分子作用的机理，为Qct在生命体系内药理作用的研究奠定一定实验基础,也为进一步研究蛋白质和有机小分子相互作用本质提供理论依据。 Scheme 1 Structure of quercetin Scheme 1 Structure of quercetin 1. 实验部分 1.1仪器和试剂 F4500荧光分光光度计(Hitachi，日本)，Tu-1221紫外-可见分光光度计（北京普析通用仪器有限公司），pH-S3C pH计（上海雷磁仪器厂），SigmaPlot2.0科学绘图软件。 Trp、Tyr、Phe和Qct（上海国药集团化学试剂有限公司），其他试剂为分析纯，0.1 mol·L-1 磷酸盐缓冲溶液为KH2PO4 + Na2HPO4 + 0.1 mol·L-1NaSO4(简称PBS，pH=7.4)，实验用水为Milli-Q超纯水。 1.2实验方法 取0.1 mol·L-1 PBS溶液3.0 ml至1-cm荧光比色皿中，用微量注射器加样品液适量于比色皿中，配成不同浓度的溶液。每次测量前反应10 min。Trp, Tyr和Phe的激发/发射波长分别为276/345±2，272/310±2和261/290±2 nm，氨基酸测试的激发和发射光狭缝宽度均为5 nm，光电倍增管PMT电压为700 V。在290-550 nm范围内记录荧光光谱。 2.结果与讨论 2.1 三种氨基酸的荧光特性 Fig. 1