临床常用血清酶、同工酶及其亚型分析.ppt

五、碱性磷酸酶及其同工酶 (一)生物化学特征 碱性磷酸酶(ALP) 广泛存在于各器官组织中，其含量以肝脏为最多，其次为肾脏、胎盘、小肠、骨骼等。血清中ALP主要来自肝脏和骨骼。生长期儿童血清内ALP大多数来自成骨母细胞和生长中的骨软骨细胞，少量来自肝。尿中ALP并非来自血液，而是直接来自肾小管细胞。人体各组织ALP同工酶可分为3大类，即胎盘ALP、肠ALP和肝／骨／肾ALP同工酶。 (二)测定方法 ALP的测定方法有多种，目前国内应用较多的方法为连续监测法，以磷酸对硝基酚(4-NPP)为底物，2-氨基-2-甲基-1-丙醇(AMP)或二乙醇胺(DEA)激活型缓冲液为磷酸酰基的受体。4-NPP在碱性溶液中为五色，在ALP催化下，4-NPP分裂出磷酸基团，生成游离的对硝基苯酚。后者在碱性溶液中转变成醌式结构，呈现较深的黄色。在波长405nm处连续监测吸光度增高速率，计算ALP活性。 (三)临床意义 在骨生长、妊娠、成长、成熟和脂肪餐后分泌等生理情况下，ALP活性可增高。除外上述生理性增高，临床上测定ALP主要用于骨骼、肝胆系统疾病等的诊断和鉴别诊断，尤其是黄疸的鉴别诊断。对于原因不明的高ALP血清水平，可测定同工酶以协助明确其器官来源。 急性肝炎包括病毒性肝炎和中毒性肝炎，ALP增高达2～5ULN，而肝硬化、胆石症和肿瘤引起的胆汁淤积，ALP增高达ULN的5～20倍。90％以上的肝外胆道阻塞患者血清ALP升高，升高的程度常和阻塞程度及病程成正比。如果血清中ALP持续低值，则阻塞性黄疸的可能性很小。若血清胆红素逐渐升高，而ALP不断下降表示病情恶化。 肝外阻塞性黄疸、转移性肝癌、肝脓肿和胆石症时胆汁ALP检出率很高，并伴有肝ALP 增加，而肝内胆汁淤积、急性肝炎、原发性肝癌等主要表现为肝ALP增多，大多数不出现胆汁ALP。 各种疾病所致骨损伤等，均引起ALP活性升高，尤其是骨ALP同工酶增高。 　　六、酸性磷酸酶及其同工酶 　　　(一)生物化学特征 酸性磷酸酶(ACP) 存在于人体不同组织，如前列腺、红细胞等，主要存在于细胞的溶酶体中，以前列腺含量最多。 　　正常男性血清中ACP约主要来自前列腺，其余部分及女子血清中的ACP可能来自血小板、红细胞、白细胞及破骨细胞等。 　　ACP同工酶分前列腺ACP(PAP)和非前列腺ACP(如红细胞ACP、溶酶体ACP、破骨细胞或吞噬细胞ACP等)两大类，在前列腺中含有丰富的PAP，比其他组织约多100倍。测定标本应及时分离血清(浆)并尽早测定。 (二)测定方法 　　ACP的测定底物、原理和方法与ALP相似，只是反应pH为酸性。国外多推荐使用磷酸百里酚酞为底物的比色法，因为PAP对此底物亲和力高，测定结果基本能反映ACP含量高低。此外还可通过用L-酒石酸这类抑制剂鉴别和估量PAP活性。由于ACP不稳定，酶活性测定困难，目前已发展一些免疫学方法特异而灵敏地测定ACP(特别是PAP)。 (三)临床意义 　 ACP及其同工酶测定主要用于诊断前列腺癌。前列腺癌时血清ACP活性显著升高，前列腺癌患者血清PAP也明显增高，其中肿瘤分化较好者增高尤为显著。 　急性尿潴留、变形性骨炎、癌肿骨转移及甲亢时ACP可轻度升高。是否为抗酒石酸盐的非PAP增高为毛细胞性白血病的重要鉴别要点。 七、淀粉酶及其同工酶 　(一)生物化学特征 淀粉酶(AMY)：人和动物只含α-AMY。人体中胰腺含AMY最多，由胰泡细胞合成后通过胰管分泌人小肠，唾液腺也分泌大量AMY入口腔开始消化多糖化合物。 AMY是一种需钙的金属酶，其最适pH在6.5～7.5之间，卤素和其他阴离子有激活作用。AMY分子量较小，易由肾脏排出，半寿期很短，约2h，所以病变时血清AMY增高持续时间很短。除肝素外，其他抗凝剂如枸橼酸、草酸盐及EDTA等都有抑制作用，故不宜用去钙血浆测定AMY。 (二)测定方法 国内外目前测定AMY应用较多的是以麦芽多糖为底物的方法，如2-氯-对硝基苯麦芽三糖苷(CNP-G3)和亚乙基封闭的对硝基苯麦芽庚糖苷(4NP-C7)法(亦称EPS法)，以后者最常用，也是IFCC的推荐方法。反应最后生成对硝基苯酚，其生成量在一定范围内与AMY活性成比，在405nm可以进行连续监测即可测出AMY的活性。 　　(三)临床意义 　　长时间以来，AMY水平一直作为评价胰腺外分泌功能的一种辅助诊断指标。人体胰腺和腮腺组织损伤时，血清和尿中的总AMY可显著增高，肾功能不全患者也有部分AMY增高。 　　在急性胰腺炎发病后2～3h AMY开始升高，多在12