骨髓白血病细胞形态与AML1_ETO 融合基因的相关性分析.docVIP

PAGE PAGE 1 骨髓白血病细胞形态与AML1_ETO融合基因的相关性分析 　　【摘要】目的：分析骨髓白血病细胞形态与AML1/ETO融合基因的关系。方法：对32例急性粒细胞性白血病患者进行AML1/ETO融合基因检测，并比较分析检出率。结果：本组32例AML1/ETO融合基因阳性22例，总检出率为68.75%，其中M2b型患者AML1/ETO融合基因检出率达95.0%，显著高于其他分型（P 　　【关键词】白血病；细胞形态；AML1/ETO融合基因；相关性 　　急性髓系白血病（AML）是临床上常见的恶性造血系统疾病，传统的诊断分型标准主要依赖于骨髓穿刺涂片镜检，对检验师要求较高。随着分子生物学的研究日益深入，发现AML患者存在遗传基因的变异，因此建议将基因检测纳入AML的诊断标准中[1]。笔者对38例AML患者进行骨髓白血病细胞形态和AML1/ETO融合基因检测，旨在探讨其相关性。 　　1资料与方法 　　1.1一般资料以本院2010年1月-2012年8月血液科32例AML患者为研究对象，男20例，女12例，年龄12～67岁，平均（41.72±6.42）岁，病程1～11年，平均（5.24±2.56）年。所有患者均排除心、肝、脑、肾等严重并发症及血友病等骨髓穿刺禁忌证。 　　1.2检测方法 　　1.2.1骨髓白血病细胞形态于髂后上棘抽取骨髓液涂片，常规细胞化学染色，光学显微镜观察骨髓细胞形态，并计数。根据细胞大小的一致性、核浆比例的多少、核染质的性状等进行初步筛选；应用氧化物酶（POX）（天津市生命科学应用研究所生产）和过碘酸-雪夫染色（PAS）染色（试剂由北京雷根生物技术有限公司提供）进行确证，经过非特异性脂酶+氟化钠抑制实验（α-NAE+NaF）、中性粒细胞碱性磷酸酶（NAP）进行鉴别，最后依据FAB协作组AML的形态学诊断标准进行分型[2]。 　　1.2.2AML1/ETO融合基因检测抽取骨髓1～2ml用肝素抗凝，采用美国雅培公司双融合AML1/ETO探针，光谱橘红直接标记ETO和光谱绿色直接标记AMI，离心，去上清液，加入0.075MKCL静置30min，加入固定液1ml混匀离心，去上清液，重复2～3次后，滴片，按操作说明书制备样品，用配有DAPI/FITC/TRITC三色激发块的O-lympusBX51荧光显微镜检查杂交信号，用OlympusPM30显微照相机进行照相，每个样本观察500个间期细胞。 　　1.3统计学处理统计不同AML分型患者AML1/ETO融合基因检出率。统计学处理采用SPSS11.5软件，计数资料采用字2检验，P 　　2结果 　　2.1本组32例AML患者中，M1型3例，M2a型2例，M2b型20例，M4型3例，M5型4例。 　　2.2本组32例AML患者共检出AML1/ETO融合基因阳性22例，总检出率为68.75%。 　　2.3各型AML患者AML1/ETO融合基因以M2b型检出率最高，达95%，显著高于其他分型（P 　　3讨论 　　急性髓系白血病（AML）中最常见t（8；21）（q22；q22）易位所涉及的野生型AML1/ETO基因对维持正常造血至关重要，而易位所产生的AML1/ETO融合基因则干扰正常造血细胞增殖与分化，并诱导白血病发生，同时也为诊断及治疗含有该融合基因的白血病提供了靶点。急性髓系白血病（AML）中最常见的t（8；21）（q22；q22）使21号染色体上的AML1基因与8号染色体上的ETO基因发生融合，形成AML1/ETO融合基因，产生一种嵌合蛋白，作为主要的抑制物改变了正常AML1-CBF（核结合因子）B这种与造血干细胞分化有关的转录复合物的生理功能，导致白血病的发生[3-5]。 　　吴学琼等[6]采用基于Taq-Man探针的RQ-PCR技术，以AML1/ETO融合基因为靶分子，定量监测15例AML患者初诊和随访时融合的表达水平，分析该基因表达水平的变化与临床特点的相关性，结论认为应用RQ-PCR技术对AML1/ETO融合基因进行定量监测，是判断和追踪该基因阳性的白血病患者疗效的良好指标，能较好地反映患者微小残留病的动态变化。笔者对32例AML患者骨髓涂片用瑞氏染色后，按照国内AML分型标准进行观察分析；进行荧光原位杂交技术（FISH）检测AML1/ETO融合基因，结果显示：32例AML患者共检出AML1/ETO融合基因阳性22例，总检出率为68.75%，其中M1型1例，M2a型1例，M2b型19例，M5型1例。其中以M2b型检出率最高，达95.0%，显著高于其他分型（P 　　由于致病因素和发病机制的不同，导致AML患者白血病细胞抗原表达不一，临床鉴别复杂，特别是原本表达不一的抗原又缺乏特异性及敏感性，造成了对AML患者临床分型和处理意见缺乏统一的认识和指南。钟