总黄酮、多酚含量的测定.docVIP

总黄酮含量的测定 一、仪器 紫外-可见分光光度计、分析天平、低速离心机、超声波提取器、恒温水浴锅、粉碎机、pH计、10mL容量瓶15个、10mL具塞试管、100mL烧瓶、10mL离心管10个、试管架2个 二、药品 芦丁标准品40mg、无水乙醇1000mL、亚硝酸钠500g、硝酸铝500g、NaOH 500g 三、实验步骤 （一）、标准曲线绘制 1. 芦丁标准品40mg置于称量瓶中80℃烘干至恒重，取烘干后的20mg芦丁标准品用水定容至100mL,得200μg/mL芦丁标准贮备液，精确量取上述浓度芦丁标准贮备溶液0、0.2、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mL分别置于10 mL具塞试管中。 2. 向具塞试管中分别加60％乙醇5、4.8、4.6、4.2、3.8、3.4、3.0 mL。 3. 然后加5％亚硝酸钠0.3 mL，摇匀，静置6 min。 4. 再加10％硝酸铝0.3 mL，摇匀，静置6 min。 5. 加4％氢氧化钠4.0 mL，用60%的乙醇定容至刻度，摇匀，静置12 min。 6. 于510 nm波长下测定吸光度，并以芦丁标准浓度值为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。研究表明芦丁标准品含量在0～0.5mg 范围内与吸光度具有良好的线性关系。 （二）、样品处理及总黄酮的提取 （以60%乙醇提取为例） 1. 将样品在80℃烘干24 h，粉碎后过80目筛置于干燥器中备用。 2. 称取500±2 mg样品于25 mL具塞三角瓶中，使样品位于三角瓶底部（重复3次）。 3. 每瓶加4 mL 60％乙醇，放超声波提取器提取2 h。提取液转至10 mL具塞离心管中。 4. 再向具塞三角瓶中加4 mL的60％乙醇，放超声波提取器提取1 h，提取液转至相应10 mL具塞离心管中，6000 r/min离心10 min，离心后取上清液于相应的10 mL具塞试管中。60％乙醇定容至10 mL，待测。 （三）、样品提取液总黄酮含量的测定 准确吸取总黄酮提取液（稀释适当倍数）2.0 mL于10 mL具塞试管中，加入60％乙醇3.0 mL,然后按步骤一中（3,4,5,6）的方法测定吸光度，试剂空白为参比（提取溶剂代替提取液），将吸光度代入标准曲线计算样液的总黄酮含量。 总酚含量的测定 一、仪器 紫外-可见分光光度计、分析天平、低速离心机、恒温水浴锅、粉碎机、pH计、超声波提取器、回流装置、10 mL具塞试管、25 mL具塞三角瓶、250 mL容量瓶 二、药品 没食子酸标准品100mg、无水碳酸钠500g、福林酚试剂100 mL 三、实验步骤 （一）、标准曲线绘制 精确称量没食子酸标准品25 mg，用水溶解后定容于250 mL容量瓶中，得到0.1 mg/mL的标准贮备溶液。分别移取没食子酸标准储备溶液0.00、0.25、0.50、0.75、1.00、1.25、1.50 mL置于10 mL具塞试管中，分别加入福林-酚试剂1 mL，摇匀后再分别加入质量分数12% Na2CO3溶液2 mL，用水定容至10 mL，摇匀。平行三组。室温下避光反应1 h后，在765 nm波长下测定吸光度。以没食子酸标准溶液的浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，制作标准曲线，研究表明，没食子酸含量在20～120μg 范围内与吸光度具有良好的线性关系。 （二）、样品总酚的提取以及样品总酚含量的测定 （以60%乙醇提取为例） 称取0.5g粉碎的样品于25 mL具塞三角瓶中，加入10 mL体积分数60%的乙醇溶液，搅拌均匀，在超声波提取器中75℃提取50 min。提取液以3000 r/min离心20 min，取上清液，量取提取液体积，采用福林-酚比色法测定样品提取液的总多酚浓度。 吸取1.00 mL总多酚提取液（稀释适当倍数）于10 mL具塞试管中，分别加入福林-酚试剂1 mL及质量分数为12%的碳酸钠溶液2 mL并用60%乙醇定容至刻度，在室温下避光反应1 h，在765 nm波长处测定样品的吸光度，试剂空白为参比（提取溶剂代替提取液），并根据工作曲线来计算提取液中总多酚含量。