KJ06-兽残分析中样品的采集、保存、制备与前处理技术及方法.ppt

* 分子印迹技术 分自印迹技术是以目标分子为模板，与功能单体通过共价键或非共价键的方式结合，再加入交联剂进行聚合反应。印迹分子(模板)除去后，聚合物中留下了大量的空穴，这些空穴和模板分子在大小及形状方而完全匹配。即“分子记忆”引入到聚合物中，该聚合物就具有反结合模板分子的选择性能。 以分子印迹聚合物 (molecularly imprinted polymers, MIPs)作为固定相。 * 2.4 浓缩与富集 旋转蒸发器浓缩：速度快，溶剂可以回收。 气流吹蒸法 K-D浓缩器：能使浓缩、回流、洗涤和定容同时进行。 真空离心浓缩法：用于热敏性组分或粘稠液体的浓缩。 浓缩过程中组分最易损失，稳定性差、蒸汽压或极性高的待测物损失更明显。蒸发温度不易过高，吹蒸速度不宜过快，不要将样品直接蒸干（加入乙二醇、硬脂酸或液体石蜡作为保持剂）。必须干燥时最后缓缓吹入氮气或空气。 * 2.5 化学衍生化技术 是指通过化学反应使待测组分定量生成适合于特定分析条件的化合物的一种方法 目的：提高检测的灵敏度与选择性；改善色谱分离；提高理化稳定性；分离结构相似的组分；辅助定性。 要求：反应速度快；反应易重复；定量完全；产物易纯化；色谱行为良好、易于分离和检测 * 2.5.1 GC衍生化方法 硅烷化:凡结构中含有活泼氢或可烯醇化酮基的化合物均可被硅烷化,常用试剂为三甲基硅烷化试剂,反应介质一般为甲苯、乙醚、二甲基甲酰胺、乙腈、吡啶。操作用防止带入水分。 酰化：用于羟基、氨基和巯基的衍生化，常用的衍生化试剂为酸酐和卤代酸酐，如乙酸酐、苯甲酸酐、乙酰氯、三氟乙酸酐等。咪唑类在衍生化过程中不产生酸，对促进反应和产物的稳定性有利。一般在吡啶中，室温下进行。 酯化或烷基化：用于羧酸和其他酸性基团的衍生化。常用试剂有重氮甲烷、甲醇。 生成肟或腙：用于含酮基的化合物的衍生化，常用试剂为盐酸羟胺、O-甲基羟胺、O-苯基羟胺、苯肼、二硝基苯肼等。 * 2.5.2 HPLC衍生化方法 HPLC能够分离除气体外几乎所有的物质 紫外、荧光或电化学检测器均属于选择性检测器，只能测定含有发色团或具有显著氧化还原活性基团的物质。 HPLC衍生化的目的是在待测物上构建或连接强的紫外/可见吸收基团或荧光基团，从而改变组分的可测性，提高灵敏度或选择性。 * 紫外-可见吸收衍生化法 胺和氨基酸的衍生化：酰氯类类、磺酰氯类、硝基卤代苯类、N-琥珀酰亚胺-对硝基苯乙酸酯、异硫氰酸苯酯、印三酮 羧酸的衍生化：在冠醚的催化下与苯甲酰甲基溴、对硝基苄基溴、萘甲酰甲基溴等反应生成酯。 羟基化合物的衍生化：衍生化试剂主要为酰氯，反应介质一般为吡啶。 羰基化合物的衍生化：主要衍生化试剂为2，4-二硝基苯肼 * 荧光衍生化 胺和氨基酸的衍生化：邻苯二甲醛、磺酰氯、荧光胺、氯甲酸酯类 羧酸类的衍生化：香豆素类 羟基类化合物：叠氮化合物 羰基化合物：丹酰肼、邻苯二胺类实际 * 电化学检测器衍生化法 乙酰水杨酰氯：与脂肪胺生成酚。 对氨基苯酚：与脂肪酸、胆汁酸、前列腺素类药物反应，生成对羟基苯酰胺类产物。 硝基苯类： * 几种衍生化方式 柱前衍生化 柱后衍生化 固相衍生化 光化学衍生化 * 3 残留分析方法建立的步骤 3.1 查阅文献与设计分析方法 3.2 建立基本测定方法 3.3 建立样品处理方法 3.4 绘制标准曲线 3.5 确定检测限与定量限 3.6 测定样品添加回收率与变异系数 3.7 稳定性分析 * 3 残留分析方法建立的步骤 3.8 分析方法评价及评价标准 3.8.1 检测限与定量限 3.8.2 添加回收率 3.8.3 变异系数 3.8.4 线性范围与相关系数 3.8.5 特异性 3.8.6 与参比方法的相关性比较 3.8.7 实验室协同研究 * 3 残留分析方法建立的步骤 3.9 分析结果判定 3.10 分析方法报告 3.10.1 概述 3.10.2 样品制备与保存 3.10.3 测定方法 3.10.4 方法评价 3.10.5 附录 3.10.6 参考文献 * 方法的检测限与规定MRL相应值的数值关系(mg/kg) 定量限可根据检测限来确定，一般应为方法检测限的2倍值。 对分析方法在定量水平上的要求通常是回收率≥70%，变异系数≤20% * 不同添加浓度对回收率的要求 * 不同待测物浓度对变异系数要求值 * THANKS！ 农业部畜禽产品质检中心（广州） 丁焕中 * 农业部畜禽产品质检中心（广州） 丁焕中 * * 1.4.2 制样程序 领取样品:从相关部门领取需要制备的样品，观察样品是否完好，如有腐败、变质、破损等非正常情况，应及时向发样部门反映，并停止制样，保存样品。如样品完好，则可开始制备样品。 制备样品:根据样品性质、状态，选择适当的