第6章-食品安全微生物指标的速测技术.pptVIP

3.1 微生物检测项目及检测方法 培养膜法——快速检测纸片技术 原理：二片塑料膜构成，上薄为盖，下厚为培养基。 操作方法：检样稀释→取1ml滴于下膜正中央→盖上膜→扩展器压成20cm2圆圈 →37℃培养24h →计数(显色的斑点) 3.1 微生物检测项目及检测方法 培养膜法——快速检测纸片技术 优点：（1）可节约玻璃仪器、培养基。 （2）可节省培养基等试剂的配置灭菌和玻璃仪器灭菌和清洗的时间、人力和费用。 （3）因为有显色剂和小方格，计数方便。 （4）节约稀释的繁琐动作。 （5）可快速测试致病菌，节省大量的实验步骤。 缺点：（1）成本比传统方法要稍高些。 （2）测试细菌总数、大肠菌群、霉菌和酵母菌时不能节约培养时间。 3.1 微生物检测项目及检测方法 螺旋平板计数法—— 原理：样品制备的菌悬液在琼脂表面形成阿基米德螺旋型轨迹。当用于分液的空心针从平板中心移向边缘时，菌液体积减少，注入的体积和琼脂半径间存在指数关系。 优点：与传统方法相比，无需稀释梯度，每个梯度倒2个平板，节省了大量人力物力。 缺点：检测时间并没有缩短，菌落总数仍需要培养48小时。需要配合自动菌落计数仪，否则人工计数更麻烦。 DWS螺旋平板接种仪 及自动菌落计数仪 平皿旋转 接种针往外移动 同时自动将样品 稀释1000倍 阿基米德螺旋型轨迹 3.1 微生物检测项目及检测方法 滤膜法——膜过滤荧光染色法 2. 标记 1. 过滤 滤膜转移， 预标记60min标记30min 3. 激光扫描 激光扫描分析仪 3分钟分析时间 结果直接显示细胞个数 3.1 微生物检测项目及检测方法 滤膜法——膜过滤荧光染色法 滤膜法常用于可过滤样品的微生物检测。 优点：灵敏度增大，菌落无扩散情况，便于计数。 缺点：需要额外的支出购买真空泵，多联支架及一次性滤膜； 如果抽滤过程空气洁净度不够，有可能造成二次污染， 尤其是对菌数要求特别严格的产品，如啤酒，澄清果汁，桶 装饮用水等。 3.1 微生物检测项目及检测方法 ATP生物荧光法——检测总菌落数 萤火虫会发光是由于它能合成将 化学物质的化学能转变为光能的生物 催化剂—荧光素酶、虫荧光素以及所 有细胞生物都产生的生物能量物质— 三磷酸腺苷（ATP）。 在有氧的条件下，虫光素酶催化虫荧光素和ATP之间发生氧化反应，形成氧化荧光素并发出荧光，其生化反应式如下： ATP生物荧光法——检测总菌落数 上式表明，只要具备适当条件，不仅萤火虫，即使在试管中也能发出荧光。当反应系统中，虫光素酶和虫荧光素处于过量的情况下，荧光的强弱取决于ATP 的数量。 在食品样品中，细菌细胞越多， ATP量越高，发出的荧光也就越强。 所以，在排除样品中非细菌ATP 干扰的情况下，通过荧光值就能确 定样品中细菌ATP的含量，从而确 定细胞数量。 3.1 微生物检测项目及检测方法 （ATP＋萤光素+萤光素酶+O2—AMP+氧化萤光素+Ppi+CO2+光） 检测原理 荧光素 荧光素酶 腺苷一磷酸 氧合荧光素 荧光 3.1 微生物检测项目及检测方法 ATP生物荧光法——检测总菌落数 优点：大大缩短库存时间，减少物流压力和成本。 缺点：ATP方法需要消耗大量的较昂贵的试剂，对仪器的清洗保养要求特别高。另外，有存在假阴性的可能。 应用：用于食品生产线和管道进行快速清洁程度检测。 用于水质检测。改良后用于食品的商业无菌检测或终产品检验。 3.1 微生物检测项目及检测方法 电阻抗法——测定细菌总数 原理：供细菌生长的液体培养基是电的良导体，在特制的测量管底部装入电极插头，即可对接种生长的培养基的阻抗变化进行检测。 阻抗变化的产生是由于微生物生长过程中的新陈代谢使培养基中的大分子营养物质(糖、脂类、蛋白质等）被分解成小分子代谢物，即较小的带电离子（乳酸盐、醋酸盐、重碳酸或氨等）这些代谢产物的出现和聚集，增强了培养基的导电性能，从而降低了其阻抗值。 LOGO LOGO 第6章 食品安全微生物指标的速测技术 微生物简介 1 微生物与食品安全 2 食品安全微生物指标速测技术 3 主要内容 微生物概念与安全事件 1 微生物与我们 2 形形色色的微生物 3 一、微生物简介 1.1 微生物概念与安全事件 微生物：微生物是自然界中一些肉眼看不见，必须借助光学显微镜或电子显微镜放大几百倍、几千倍甚至几万倍才能观察到的微小生物。 包