分离胶浓缩胶配方.pdf

SDS 1、 SDS：聚丙烯酰胺凝胶电泳 2、 Acr ：丙烯酰胺；配胶时用 30%Acr （质量比 Acr ：Bis=29:1 ） 3、 Bis ：甲叉双丙烯酰胺 4、 DDW ：超轻水 5、 SDS：十二烷基硫酸 /磺酸钠，阴离子去污剂（配胶时用 10%） 4 2 4 配胶时用 10% 6、 APS ：过硫酸铵 NH S O 7、 TEMED ：四甲基乙二胺，促凝剂 8、 Tris-Hcl ：3 羟基氨基甲烷盐酸缓冲液，配胶时（分离胶 ph=8.8 ，浓缩胶 ph=6.8 ） 9、 DTT ：二硫苏糖醇， DTT 也常常被用于蛋白质中二硫键的还原，可用于阻止蛋白质中的 半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键。 10、 IMA ：碘乙酰胺， 碘代乙酰胺用于有机合成， 在蛋白组学中组氨酸和半胱氨酸的烷 基化试剂，用于多肽测序以及酶抑制剂等，蛋白组学级试剂。 CH2ICONH2 ，是和 碘乙酸一样，可通过下列反应不可逆地抑制 SH 酶类的物质。 1) 根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度， 再按照下面的表格配制 SDS的 分离胶 (即下层胶 )： SDS分离胶浓度 最佳分离范围 6% 胶 50-150kD 8% 胶 30-90kD 10% 胶 20-80kD 12% 胶 12-60kD 15% 胶 10-40kD 成分 配制不同体积 SDS分离胶所需各成分的体积（毫升） 6% 胶 5 10 15 20 30 50 蒸馏水 2.0 4.0 6.0 8.0 12.0 20.0 30%Acr-Bis(29:1) 1.0 2.0 3.0 4.0 6.0 10.0 1M Tris,pH8.8 1.9 3.8 5.7 7.6 11.4 19.0 10%SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5 10%过硫酸铵 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5 TEMED 0.004 0.008 0.012 0.016 0.024 0.04 成分 配制不同体积 SDS分离胶所需各成分的体积（毫升） 8% 胶 5 10 15 20 30 50 蒸馏水 1.7 3.3 5.0 6.7 10.0 16.7 30%Acr-Bis(29:1) 1.3 2.7 4.0 5.3 8.0 13.3 1M Tris,pH8.8 1.9 3.8 5.7 7.6 11.4