预防用以病毒为载体的活疫苗制剂的技术指导原则-辽宁食品药品.doc

PAGE PAGE 6 预防用以病毒为载体的活疫苗制剂的技术指导原则 一、前言 ????以病毒为载体的预防用活疫苗是指将外源目的基因片段构建在病毒载体中，重组后的病毒载体导入机体后可表达目的蛋白，目的蛋白通过刺激机体产生特异性免疫学反应而达到预防某种疾病的目的。该指导原则适用于以病毒为载体的预防用活疫苗制品。其目的是为该类制剂提供一个共同的原则，具体的方案应根据这些原则，确定具体的申报内容。其基本原则是：安全有效，质量可控，同时应鼓励创新，促进以病毒为载体疫苗的研究。对一些新的技术路线要建立相应的质控要求，可有一定的灵活性，应注意到以病毒为载体活疫苗只是处于研究的初级阶段，而且与常规生物制品相比有其本身的特点，需要不断的积累经验。为此，申请者应加强咨询和论证，提出一个确保安全有效而又适合实际的申报资料。同时，对每个方案中各个阶段的操作过程、中间及最终产品的制备，务必制订标准操作规程及质控标准，并予严格实施。 ????二、疫苗构建的基本要求 ????（一）国内外研究现状、立题依据和目的及预期效果 ????1．应了解所预防或治疗疾病的流行情况、疾病的危害程度等；包括国内及国外对该类疾病的预防和治疗手段。 ????2．应了解国内外同类产品研究和开发等情况，其中包括所用的DNA载体、目的基因片段、生产工艺、临床前试验和临床试验的结果及进展，以及该类产品所面临的主要问题。 ????3．对研制该类DNA制品用于预防疾病的有效性、安全性及必要性进行分析。 ????4．应对该方案与国外内已批准的或正在进行的方案的不同之处、特点及其优越性等进行分析。凡属新的方案，应提供其优越性及安全性的依据。 ????5．利益风险比。根据该预防方案可能达到的效果及可能出现的副作用或危害，对总体的利弊权衡的进行评价，并提出拟采取避免或减少其危害性或副作用的措施。这种评价将是该方案能否获得批准的重要依据之一。 ????（二）病毒载体及宿主细胞的有关内容 ????1．目前所用的病毒载体主要包括逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体以及痘苗病毒载体等。为此，应明确病毒载体的来源、结构，并进行必要的专利查询，其中包括载体DNA的限制性内切酶图谱。若有特殊的元件，如启动子、增强子以及PolyA位点等，应提供详细资料。若改变结构（如丢失片段或插入片段），须对相应片段进行测序分析。若属新的或改变结构的病毒载体，须对组建的材料、方法、组建步骤及鉴定进行详细的研究。 ????2．生产用细胞：来源、传代历史以及质控的材料。包括细胞形 态学、染色体组型、支原体、细菌、病毒等外源因子的检测结果。若需用其它辅助病毒，须明确来源、分离的方法步骤等。 ????（三）目的基因 ????1．明确目的基因来源的病原体及其它相关生物分子的基因序列及结构，并与我国主要流行株的核苷酸和氨基酸同源性进行分析以及明确其血清型、基因型和亚型，对该种基因型或血清型的流行情况进行分析，若存在不同的血清型或基因型，应对所选择的血清型或基因型与其它血清型或基因型交叉反应或交叉保护性进行分析和研究。 ????2．对目的基因的序列、大小、来源以及表达产物的预计大小进 行分析；明确目的基因选择的依据以及其表达蛋白在防中的作用。 ????3．若对目的基因进行了修饰，应对其修饰后的基因序列以及修 饰后基因与人类已知基因序列的同源性进行分析。若在表达的目的重组蛋白以外有其它氨基酸寡肽同时表达时，应对寡肽的作用和选择的依据进行分析。并对基因修饰或重组的利弊权衡进行分析。 ????（四）重组病毒的构建及种子细胞库的建立 ????1．应对穿梭质粒与目的基因连接的详细步骤进行研究，并对构建以后的重组穿梭质粒进行检定和确证。对重组穿梭质粒的转化、扩增和纯化条件进行研究。 ????2．对目的基因片段导入病毒的过程进行研究，建立切实可行的 筛选和确证的方法。对含有目的基因片段的重组病毒的特征进行分析。 ????3．对重组病毒的特性进行检定，必要时进行序列分析，研究必 要的控制元件和选择标记基因有无变异以及对插入的目的基因序列进行分析，检查有无变异。 ????4．应当对重组病毒感染细胞条件进行优化。对重组病毒的的浓度、含量等进行分析。对重组的保存条件以及稳定性进行研究。应当建立重组病毒库。应对重组病毒库的外源因子进行分析。 ????5．产病毒的种子细胞库的组建：由病毒载体转染包装细胞或非包装细胞所组建的能复制并产生病毒的细胞系称为产病毒细胞系，即原始种子细胞库。该原始种子细胞库的组建过程必须予以详细说明，包括材料、方法、步骤、细胞系的鉴定。其中应当包括细胞形态学、染色体组型、传代次数、稳定性、病毒滴度的检测、病毒介导目的基因的表达活性以及外源因子的检查等。 ????6．复制型病毒的检测：包括