03哺乳动物组织基因组DNA提取.ppt

2005-3-22 2005-3-21 2002级生物技术专业 2004-2005（下）分子生物学实验 Genomic DNA Extraction from Mammal Tissue 哺乳动物组织基因组DNA提取 一、实验目的(Experimental Purpose) After the experiment done, students should be able to know how to extract genomic DNA from mammal tissue, and to run an agarose gel. As a further precaution, ethylene diamine tetraace-tic acid (EDTA) is include-ed in the buffers to chelate Mg2+. This will reduce deoxyribonuclease (DNase) activity because of the Mg2+ requirement of these enzymes. 为了进一步保护DNA样品的完整性，通常需要在缓冲液中添加乙二胺四乙酸(EDTA)以整合Mg2+，这样将会减少脱氧核糖核酸酶(DNase)的活性，因为该酶必须在有Mg2+存在时才会起作用。 The protocol described here result in DNA that is easily cut with restriction enzymes and, therefore, is useful for Southern Hybridization studies. If the DNA is to be used to construct a clone bank, higher molecular weight DNA is desirable, so the vortex step should be eliminated. 本实验方法分离得到的染色体DNA样品易被限制酶切割，因此，较适用于Southern杂交的研究。如果所制备的基因组DNA是用于构建克隆文库，要求得到较大分子量的DNA，则必须省略其中的振荡步骤。 三、试剂与器材（Reagents and apparatus） Ⅱ. Material Liver of mice Ⅲ. Reagents Tris、SDS、EDTA、 HCl、 NaOH 、 Sodium acetate、 Acetic acid、 Phenol、Chloroform、Ethanol、Isoamylol、 TE buffer 、 Protease K、RNase A、 Agarose 、DNA molecular weight markers 、Boric acid、Sugar、 Bromophenol blue、 Fluorescent dye(Gelview) 四、实验步骤(Experimental Procedures) 冰浴处理生理盐水 玻璃匀浆器 冰冷的生理盐水清洗 配制工作液 处死小鼠 取出肝脏 组织匀浆液 酶解液 2ml匀浆液 组织细胞液 玻璃匀浆器匀浆 移至1.5ml离心管 5000r／min30—60s 加400ul 吹散 加400ul 离心 无菌水 酶解液 水浴处理（55℃、12—18h） 四、实验步骤(Experimental Procedures) 等量分装在两支离心管内 加入20ul的RNase 加入等体积①提取液 4℃ 10min 酶解样品 待抽提的样品 抽提 静置 离心 配制