兽医生物制品学第七章实验动物、动物实验基本技术方法.ppt

第七章 实验动物、动物实验的基本技术方法 第一节 概述 一、实验动物的概念： 指人工饲养的、对携带的微生物实行控制，遗传背景和来源清楚，用于科研、教学、生产以及检验的动物。 二、实验动物的共同特点： 进化高等与人畜生理系统相同。 对理化因素敏感与人畜相同。 成本低，易饲养管理。 生长繁殖快。 三、实验动物用途、研究与生产现状 用途： 医学和兽医学。 生物制品 制药工业 胚胎生理学 食品饲料 农药实验 食品添加剂中有害因子 武器和航天研究 发展现状： 实验动物研究外国起步较早，我国晚，已育成近交系615，津白Ⅰ号，津白Ⅱ号等得到了国际承认。我国整体实验动物事业在数量和质量上还处于较低水平。 第二节 实验动物的分类 一、根据来源和实际应用分类 实验动物：小白鼠、大白鼠、豚鼠、地鼠、家兔。 家畜家禽：猪、马、牛、羊、鸡鸭鹅等。 野生动物：青蛙，蟾蜍，鱼，鸟，野鼠。 观赏动物：犬，猫，孔雀。 二、根据遗传控制程度分类： (一）近交系动物：一般称纯系动物，近交连续20代以上，近交系数达88、6—99、8%，现有品系在300种以上。 特点： 基因纯合； 资料可查。 遗传稳定； 实验可比性。 品系特殊。 缺点：近交衰退，隐形基因暴露和多基因平衡破坏。 （二）封闭群动物：五年内不引进，群内随机交配，一般是50—100头的群。 特点： 近交系数低。 生活力强。 繁殖量达。 成本低。 （三）突变系动物：由于正常染色体个别基因发生突变，而导致动物性状的改变。 全球有350种，大鼠50种，如癫痫大鼠，高血压大鼠，裸鼠（无胸腺），不同肿瘤多发鼠。可用于研究病的的机理和治疗药物。 （四）杂交群动物：两品或多品系之间有针对性的杂交，具有强的生命力和高的生产性能。如猪三元杂交：杜洛克♂+长白—大约克♀→杜长大，为我国主流商品猪品系。 （五）混杂群动物：血统不清，遗传性能不稳定的动物。优点：适应能力强；容易饲养，成本低。缺点：实验结果重复性差，反应不规则。 三、根据微生物学控制程度分类 农业部规定生物制品实验使用动物要求达到清洁级动物，鸡，鸭胚胎要求达到SPF标准。 普通级动物：（一级动物），未特殊控制的动物，但不携带人畜公患微生物，如沙门氏菌，结核杆菌，巴氏杆菌，李氏杆菌，钩端螺旋体，皮肤霉菌及体外寄生虫。 清洁级动物（二级动物）：种群来自剖腹产SPF动物，饲养管理卫生，种群清楚，微生物控制达到清洁动物标准。 SPF动物（三级动物）：不存在某种病原微生物或寄生虫的动物。通过检查淘汰阳性动物选育。原种群多来自无菌动物或悉生动物基础上选育。 无菌动物（四级动物）：GF—germ free animals。指体内检查不出任何细菌、病毒、寄生虫的动物。是由剖腹产，无菌环境饲养的动物。 悉生动物（gnotobiotic animals）：是有无菌动物人工植入某种已知微生物的动物。如单菌动物，双菌动物，三菌动物，也可以叫X联悉生动物。 四 、常见实验动物的特性及用途 小白鼠：用途，半数致死量实验，药物及生物制品实验等。注意，小白鼠对热敏感，不可超过32℃ 大白鼠：用途，基本同小白鼠，并对维生素，氨基酸敏感，可做营养实验。 豚鼠：用途，做补体使用；变态反应；不合成维生素C；对抗生素敏感；对霉变饲料和温度敏感。 地鼠：用途，肾细胞培养用；癌症研究；对病毒敏感。 家兔：用途，生物制品制造；药品安全、效力、热原质实验；对细菌和病毒敏感。 动物实验的基本技术方法 一、动物实验前的准备 理论准备：了解有关实验动物方面的知识 条件准备：仪器、药品、试剂、实验动物、 动物实验室 预实验：检查各项准备工作是否完善，实验 方法和步骤是否切实可行。 2、大鼠的抓取与固定 3、豚鼠的抓取与固定 犬的抓取与固定 6、猴的抓取与固定 7、小型猪的抓取与固定 三 实验动物的编号、标记 在动物实验中，为了观察每个实验动物的反应情况，必须对实验动物进行编号、标记。标记的方法应保证号码清楚、耐久、简便、易认和适用。 现介绍几种常见标记方法：染色法、标牌法、烙印法、耳孔法。 1．染色法 染色法是用化学剂在动物身体明显部位如被毛、四肢等处进行涂染或用不同颜色等来区别各组动物，是实验室最常用、最容易掌握的方法。 常用的编号标记溶液有： ①3％一5％苦味酸溶液，涂染成黄色； ②2％硝酸银溶液，涂染成咖啡色(涂后需光照10 min)； ③0.5％中性红或品红溶液，涂染成红色； ④煤焦油酒精溶液，涂染成黑色； ⑤龙胆紫溶液，涂染成紫色。 标记时用标记笔签蘸取上述溶液，在动物体表不同部位涂上斑点，以示不同号码。