植物主要组织培养方法笔记.ppt

（1）茎尖培养脱毒原理： 感染病毒植株的体内病毒的分布并不均匀，病毒的数量随植株部位及年龄而异，在根尖和茎尖病毒含量很少或不含病毒。 ☆植物的种子一般是无毒的——遗传性状不够稳定，易失去F1代杂种优势，不利于成年型的保持，繁育周期较长。 （2）茎尖培养脱毒方法： 茎尖 丛生芽 生根 再生株 无毒） 无毒 茎尖培养： 大茎尖 小茎尖 叶原基 顶端分生组织 ☆大茎尖较大，可能带病毒；小茎尖较小0.1－1.0mm，一般无毒。 大 脱毒效果差，成苗易 茎尖 小 脱毒效果好，成苗难 在满足培养材料成苗的前提下，茎尖越小越好。 评价： i、行之有效的脱毒方法，与热处理 结合效果更佳; ii、对难再生的植物，可结合微体嫁 接等方法获得无毒种苗； 茎尖＋实生苗砧木 2.茎尖微体嫁接 木本植物茎尖培养难以生根成植株，将实生苗砧木在人工培养基上种植培育，再从成年无病树枝上切取0.4—1.0mm茎尖，在砧木上进行试管微体嫁接，以获得无病毒幼苗。 3. 珠心组织培养 柑橘类植物除合子胚外，还有多个珠心胚。珠心组织与维管束系统没有直接联系，故珠心组织培养可获得无病毒植株。 4. 愈伤组织培养脱毒 通过植物的器官和组织的培养去分化诱导产生愈伤组织，然后从愈伤组织再分化产生芽，长成小植株，可以得到无病毒苗。 通过愈伤组织培养获得再生无病毒植株的原因有以下几种可能性： ①病毒在植物体内不同器官或同一器官不同组织中分布不均匀，由那些无病毒细胞产生的愈伤组织就是获得无病毒苗的基础。 ②有些愈伤组织细胞病毒浓度较低，在愈伤组织细胞快速分裂的过程中，病毒的复制能力衰退或丢失。 ③变异 植物病毒病症状初步识别 病状：变色（花叶、斑驳、脉明） 、畸形（如皱缩、卷叶、矮化、小叶、小果、叶或果不对称、丛生、耳突等）、坏死（坏死斑点、环斑、蚀纹等） 无病症。 与非侵染性病害比较，有发病中心（在田间表现为发病不均匀。能传染。 三、脱毒植物检测及保存 1、检测方法： ①指示植物法 ②血清法（生理、生化指标） ③电镜检测 ④酶联免疫鉴定法（ ELISA ） ①指示植物(indmatingplant)法 指具有能够敏感表现某种病毒的专化性症状的寄主植物。它对病毒极为敏感。将待测植物的汁液接种到指示植物上，如果被测植物带毒，则指示植物上会出现特定症状。因此指示植物又称鉴别寄主。它只能鉴定靠汁液传染的病毒。 指示植物法最早是美国的病毒学家Holmes 1929年发现的。他用感染TMV的昔通烟叶的粗汁液和少许金刚砂相混合，然后在烟叶子上摩擦2—3d后叶片上出现了局部坏死斑。在一定范围内，枯斑与侵染性病毒的浓度成正比。这种方法条件简单，操作方便，故一直沿用至今，仍为一种经济而有效的鉴定方法。枯斑法不能测出病毒总的核蛋白浓度，而只能测出病毒的相对感染力。 由于病毒的寄生范围不同，所以应根据不同的病毒选择适合的指示植物。此外还要求所选择的指示植物不但一年四季都容易栽培，并且在较长的时期内还能保持对病毒的敏感性和容易接种，而且在较广的范围内具有同样的反应。指示植物一般有两种类型：一种是接种后产生系统性症状，其病毒可扩展到植物非接种部位，通常没有局部病斑；另一种是只产生局部病斑，常由坏死、褪绿或环状病斑构成。 几种马铃薯病毒种类的症状 种类 症状 指示植物 马铃薯X病毒 脉间花叶 千日红 曼陀罗 辣椒 心叶烟 番茄 马铃薯S病毒 叶脉深陷粗缩 千日红 苋色藜 光曼陀罗 马铃薯Y病毒 随品种而异，有些 野生马铃薯 洋酸菜 微花叶、有些坏死 曼陀罗 马铃薯卷叶病毒 浅白色、紫色、红色 洋酸菜 方法 摩擦接种法： 嫁接法： 木本多年生果树植物及草莓等无性繁殖的草本植物用汁液接种法比较困难，所以通常采用