齐鲁细胞TIL细胞治疗手册.docVIP

. . 1、TIL细胞简介 肿瘤浸润淋巴细胞（Tumor Infiltrating Lymphocytes，TIL）是通过采集患者胸腔积水或者腹水，经过体外激活扩增培养，得到的一种在生理条件下能够杀伤肿瘤细胞的细胞群。它是新一代的特异性免疫活性细胞疗法，具有高效、特异、副作用小等优点，可有效辅助恶性肿瘤的治疗。 恶性顽固性胸腹水多数为晚期肿瘤或转移瘤所引起的严重并发症，也称癌性腹水，用常规的手段治疗效果不佳，不良反应大，且易反复。癌性胸腹水在最初可能对生活质量影响不大，但如果进展迅速可导致病情恶化及死亡，应及时采取相应措施控制癌性胸腹水，缓解症状，为全身治疗创造条件，提高患者的生活质量，癌性胸腹水的淋巴细胞是一种特殊形式的肿瘤浸润淋巴细胞（TIL细胞），主要源于T淋巴细胞，它对肿瘤细胞具有一定的识别能力，但杀伤活性低。从癌性胸腹水中分离并提取TIL细胞，经一系列细胞因子体外诱导并扩增后将其回输到患者的胸腹腔中，可通过以下几种途径发挥治疗作用：a. TIL细胞能特异性识别并杀伤自体肿瘤细胞，引起肿瘤供血血管的损伤，使其闭塞，减少渗出并发挥抗肿瘤作用，有效抑制肿瘤细胞的正常生长；b. TIL细胞可抑制肿瘤细胞产生的能损伤腹膜表面的蛋白因子，抑制细胞内组织胺成分的释放，一减轻腹膜表面的渗出，并促进损伤的腹膜表面的修复，使渗出液尽快吸收，从而达到治疗作用；c. 提高机体免疫功能。 该治疗项目能有效控制胸腹水积液、缓解症状、提高患者的生活质量，且副作用小，症状改善的同时也为临床其他治疗如手术、化疗、放疗创造了条件，提高肿瘤综合治疗的疗效。 2、TIL的抗肿瘤途径 TIL细胞杀伤肿瘤细胞主要依赖其中的CTL细胞的有效激活和有效行使功能。T细胞转化为效应细胞，需要有两个刺激信号，第一激活信号由TCR与抗原肽：MHC分子复合物结合提供；第二激活信号T细胞上的CD28与抗原提呈细胞(APC)上B7分子结合提供。通过该途径杀伤肿瘤细胞机制目前已经清楚，另外研究证明TIL杀伤肿瘤还有3条途径：①Fas介导的细胞凋亡，其主要机制为淋巴细胞通过表面的Fas配体（FasL）与靶细胞上的Fas结合，引起细胞DNA片段化，导致细胞发生凋亡。②穿孔素/颗粒酶B介导的细胞凋亡。③TIL分泌一些分子如TNF-α，IFN-γ等介导的细胞溶解与凋亡，该途径可通过释放颗粒或直接细胞接触杀伤靶细胞。 3、TIL细胞表型 TIL主要是由T细胞、NK细胞组成。在抗瘤作用中， T细胞是最主要的免疫效应细胞，并且T细胞中以CD4+、CD8+为主。Radoja等发现TIL细胞群还可表达多种激活标记物，有CD69、CD95L、CD122和LFA-1以及分泌IL-2。 关于扩增后的TIL表型变化，大多数的实验结果均显示CD4+细胞比例呈增长趋势，而CD8+细胞比例增长趋势明显，CD4+/CD8+比例降低。在不同的培养时期，TIL表型也有差异。初始分离时TIL表型以CD3+T细胞为主，CD4+/CD8+值为1.24，说明机体免疫功能处于抑制状态，经培养后CD8+T细胞的比率明显升高，CD4+/CD8+值下降为0.28~0.29。这表明几乎激活所有的细胞毒性T淋巴细胞，使得CD3+CD8+T细胞成优势生长。 4、TIL的实验和临床应用 1988年Rosenberg等首次应用TIL静脉回输并联合IL-2、CTX治疗20例恶性黑色素瘤，其中12例达到部分或完全消退。此后研究人员陆续做了许多实验，2002年Rosenberg实验室在Science上发表了研究成果。他们采用TIL对13例化疗无效的晚期恶性黑色素瘤患者进行免疫替代疗法，结果6例获得部分缓解，4例取得混合型疗效。 目前国内外报道TIL对肿瘤引起的恶性胸腹水具有良好的治疗作用。国内有学者对50例体腔积液患者进行TIL治疗。50例患者中18例由肺癌引起的胸腹水，8例是乳腺癌引起的胸水，6例由肝癌引起的胸腹水，10例结直肠癌引起的胸腹水，5例卵巢癌引起的胸腹水，3例是其它原因引起的胸腹水。经过TIL治疗后，结果见下图。 Fabbri等采用TIL联合IL-2对39例病人进行治疗，结果64.7%病人生存期超过37个月；44.4%病人生存期超过21个月；2例病人完全治愈。 5、TIL细胞的适用症和禁忌症 5.1. TIL细胞的适用症 适用于各种恶性胸腹水 5.2. TIL细胞的禁忌症 脏器移植者； T细胞淋巴瘤、T细胞白血病； 严重的自身免疫性疾病者； 不可控制的感染性疾病； 对细胞培养过程中所用生物制剂过敏者； 怀孕或哺乳期妇女； 器官功能衰竭者,具体器官标准如下： 心脏：IV级以上 肝脏：达到国内肝功能分级C级以上 肾脏：肾功能衰竭及尿毒症 肺：出现严重的呼吸衰竭症状，累及到其他脏器，如肝、肾功能 脑：脑转移并伴意识障碍者 6、TIL细胞治