课件：GD的临床生化化学检测.ppt

可编辑 可编辑 G6PD 的临床生物化学检测 中国·南宁 黄崇庭 * 目 录 一、G6PD与G6PD缺乏症 二、G6PD的发病机制 三、G6PD的流行病学与遗传规律 四、G6PD临床生物化学检测 五、华南常见G6PD试剂盒的概况 六、美康G6PD调试经验 七、案例分享 一、G6PD与G6PD缺乏症 1、什么是G6PD？ G6PD是葡萄糖6磷酸脱氢酶的简称，是一种存在于人体红细胞内，协助葡萄糖进行新陈代谢的一种重要的酶类，在这代谢过程中会产生NADPH（还原型辅酶Ⅱ）的物质能以保护红细胞免受氧化物质的威胁。 G6PD缺乏时，若身体接触到具氧化性的特定物质或服用了这类药物，红血球就容易被破坏而发生急性溶血反应。G6PD 对于磷酸戊糖旁路至关重要，而该途径可为髓鞘脂酸形成提供 NADPH 。 2、什么是G6PD缺乏症？ G6PD缺乏症是由G6PD基因突变，导致该酶活性降低，红细胞因为缺乏NADPH而不能抵抗氧化损伤而遭受破坏，引起溶血性贫血的一种遗传病。常因食用蚕豆而发病，俗称“蚕豆病”。 二、G6PD的发病机制 葡萄糖的代谢途径，主要是糖酵解进入三羧酸循环，产生ATP，次要途径是磷酸戊糖途经，产生NADPH和磷酸核糖。 二、G6PD的发病机制 磷酸戊糖途经 磷酸戊糖途经 G6PD G6P 6-磷酸葡萄糖酸内脂+NADPH G6PD 谷胱甘肽还原型+氧化性物质 谷胱甘肽氧化型 NADPH 在红细胞内，谷胱甘肽还原型可以抵抗氧化性的物质，在维持红细胞的细胞膜稳定方面起到重要作用，如果G6PD缺乏导致NADPH不足，谷胱甘肽的作用降低，从而使红细胞模受损，在一定条件下容易产生红细溶血，引起一些不良症状。 三、G6PD的流行病学与遗传规律 1、G6PD流行病学 据估计, 全球约有4亿人受累, 我国华南及西南各省较常见, 主要分布在热带和亚热带, 我国的南方地区是高发区,尤其是广西、广东、云南、福建等省, 北方地区较少见。我国各地发生率报道不一,上海为0.78%、长沙0.90%、南昌为1.20%、南宁为7.20%、昆明为2.50%。此病广东地区平均发病率为5% ～ 10%, 广州市为3.70%、东莞3.20%、深圳2.30%, 中山发生率4.20%。 2、G6PD的遗传规律 G6PD缺乏程度与性别的关系，G6PD缺乏是伴X不完全显性遗传,基因位于X染色体上。 缺失： 男性只有一条X染色体, 一旦这唯一的染色体缺失G6PD基因, 则表现为G6PD重度缺乏, 而女性有两条X染色体, 如果仅有1条X染色体缺失G6PD基因, 则为杂合子, 表现为中度缺乏, 只有两条X染色体均缺G6PD基因才表现为重度缺乏。 基因突变：不同的基因突变类型，可以导致G6PD结构不一样，酶活性有差异，即使G6PD基因没有缺失，也有可能存在不同程度缺乏。 四、G6PD临床生物化学检测 1、G6PD检测的临床意义 红细胞G6PD 催化反应生成的NADPH 是谷胱甘肽还原酶的辅酶，还原型谷胱甘肽(GSH) 是保持血红蛋白稳定性及红细胞膜完整性的必要条件。红细胞G6PD 缺乏者，在服用某些药物(如抗在药、酬类药、伯氨哇附中、磺胶等)及食用蚕豆后，代谢产生的氧自由基，或与氧合血红蛋白作用形成的H2O2使GSH 氧化成的琉基失去GSH 的保护，被氧化变性形成Heinz 小体。红细胞膜失去疏基保护而功能受损，导致溶血。所以检测患者G6PD，可以对多种溶血性病进行早期诊断和早期预防。 适用人群： 新生儿及其父母：可以早期筛查新生儿是否缺乏G6PD，了解家庭遗传方式。 婚检：分析后代可能缺乏G6PD的概率。 溶血性疾病患者：鉴别和分析溶血性病类型和原因，有利于临床采取适当治疗措施和药物治疗。 2、G6PD的检测方法 2.1 比色法（生化仪） G6PD 活性校正值测定 原理：红细胞G6PD 催化G6P 生成6-磷酸葡萄糖内脂，后者很快氧化成6-磷酸萄糖酸(6-PGA) ，同时NADP 被还原成NADPH 。在340 nm 处监视NADPH 吸光度的升高，计算酶的活性。红细胞中还含有6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶( 6PGD)，催化6-PGA 脱羧，生成核酮体糖-5-磷酸，同时使辅酶NADP 还原成NADPH。在本测定系统中，由6-PGA和G6 P 组成的底物系统，测得的酶活性，减去单独以6-PGA 为底物时测得的酶活性，代表真正G-6-PD 的活性。本法测定包含如下2 个反应式: （1）G6P+ NADP+