课件：MALDIOFMS在细菌检测中的应用.ppt

1. MALDI-TOF-MS的优势与特点 准确度高 鉴定到菌种甚至血清型，准确度达90%以上 灵敏度高：可达到fmol级 快速：检测只需几分钟 可高通量筛选：可进行几十到几百个样本同时点样 受样本中杂质的影响较小 无需预先培养或分离，可直接进行检测 * MALDI-TOF-MS方法学评价 2. MALDI-TOF-MS目前的局限性 基质的选择、基质溶剂的组成样品的处理及样品的上样方式 细菌不同的培养基、培养时间及用菌量 尚未形成一种成熟的、通用的标准化实验操作规程 所适用的检测细菌仍然有一定的限制 方法的准确性依赖于数据库中菌种的信息量，目前国内菌种数据库中的质谱分析图谱量较少，限制了检测的准确性 * MALDI-TOF-MS方法学评价 3. MALDI-TOF-MS的展望 目前国内尚未完善各种细菌菌株的质谱图数据库。 数据库中的谱图绝大多数都是国外菌株的资料，而且不同国家和地区的菌株可能存在明显的地理差异。 需要采用国内分离的菌株尽快建立适合我国各种细菌检测和鉴定的谱图数据库，并不断增加数据库的菌株种类和数量，才能保证该技术应用的准确性。 该技术对不同菌株的检测灵敏度和准确性、多血清型细菌的分型鉴别准确性以及样品处理、质谱图采集和分析等，还有许多问题需要研究和改进。在试验方法的标准化方面也需要深入探讨。 * MALDI-TOF-MS方法学评价 * THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 * 应用： 由于色谱仪－质谱计联用后给出的信息量大，该法与计算机联用，使质谱图的规格化、背景或柱流失峰的舍弃、元素组成的给出、数据的储存和计算、多次扫描数据的累加、未知化合物质谱图的库检索，以及打印数据和出图等工作均可由计算机执行，大大简化了操作手续。 质谱法特别是它与色谱仪及计算机联用的方法，已广泛应用在有机化学、生化、药物代谢、临床、毒物学、农药测定、环境保护、石油化学、地球化学、食品化学、植物化学、宇宙化学和国防化学等领域。 * 质谱的基本概念 纯化 离子分离 分析 质谱仪： 质谱仪种类繁多，不同仪器应用特点也不同。 在300℃左右能汽化的样品，可以优先考虑用GC-MS进行分析，因为GC-MS使用电子轰击法电离源（EI源），得到的质谱信息多，可以进行库检索。 在300 ℃左右不能汽化，需要用LC-MS分析，此时主要得到分子量信息，如果是串联质谱，还可以得一些结构信息。 如果是生物大分子，主要利用LC-MS和MALDI-TOF分析，主要获得分子量信息。对于蛋白质样品，还可以测定氨基酸序列。 * 质谱的基本概念 质谱仪： 质谱仪的分辨率是一项重要技术指标，高分辨质谱仪可以提供化合物组成式，这对于结构测定是非常重要的。 双聚焦质谱仪，傅立叶变换质谱仪，带反射器的飞行时间质谱仪等都具有高分辨功能。 * 质谱的基本概念 * 质谱的基本概念—质谱仪 （二）基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 * 1. 什么是MALDI-TOF-MS 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization Time-Of-Flight Mass Spectrometry） 最近发展起来的一种质谱技术，能够提供各具特征的微生物蛋白质质量指纹图谱，通过检索特征性质质谱峰数据库或与已知微生物的质谱峰比较，来实现对微生物的快速鉴定 具有快速、高灵敏度、高分辨率等优点，能够对核酸、蛋白质和多肽等生物大分子进行微量分析. * 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 2. 主要概念 MALDI（Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization） 是一种直接气化并离子化非挥发性生物样品的质谱离子化方式。 将被分析物的溶液和某种基质溶液混合，蒸发溶剂，使被分析物与基质成为晶体或半晶体， 再用一定波长的脉冲式激光进行照射，基质吸收激光能量后，均匀地传递给待分析物，使待分析物瞬间气化并离子化。 使用基质的主要目的是保护待分析物不会因为过强的激光能量导致化合物被破坏。 * 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 2. 主要概念 TOF（Time Of Flight），飞行时间分析器： 具有相同动能，不同质量的离子，因其飞行速度不同而分离。 如果固定离子飞行距离，则不同质量离子的飞行时间不同，质量小的离子飞行时间短而首先到达检测器。 * 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 3. 基本原理： 将微生物与等量的基质分别点在加样板上，溶剂挥发后形成样品和基质的共晶体 基质从激光中吸收能量使样品解吸，基质与样品之间发生电荷转移使得样品分子电离 经过飞行时间检测器，根据到达检测器的飞行时间不同而被检测。 即通过测定离子的质荷比（M/Z）与离子的飞行时间成正比来检测离子的