课件：§双波长和三波长分光光度法.ppt

因此，必须有一种通用的方法，即计算法。在这种方法中，可根据情况任选，由作图法找到近似波长，然后通过式（3-2）计算使之为零以确定。 3．三波长法的分析应用 三波长法在药物分析中有较广泛的应用。安钠加注射液含有跏啡因和苯甲酸钠，在0.1N盐酸介质中两种组分的吸收光谱相互重叠，采用三波长法可同时测定上述两组分，消除相互间的干扰，测定苯甲酸钠的三个波长为：272.0，288.0，247.6。复方氨基比林注射液含有氨基比林，安替匹林和巴比妥，在酸性溶液中，巴比妥在230以上无吸收，而氨基比林和安替匹林则有较强的吸收，但相互重叠，用三波长法，可在巴比妥存在下直接测定氨 基比林注射液中氨基比林和安替匹林含量。 在实际工作中，三波长法中的波长选择和计算比单波长法麻烦而费时，但测定的准确度、精密度比解联立方程组分析混合组分的方法高。随着计算机技术的普及，用电子计算机控制的分光光度计的广泛应用，已设计出三波长法的专用计算程序，岛津UV-240、UV-260型双光束紫外-可见分光光度计就是具有这种功能的仪器。可对样品溶液中待测组分的三波长自动 测定并进行结果计算，操作简便快速。 第三节 导数分光光度法 在分光光度分析中引入导数技术，扩展了分光光度法的应用范围，在多组分同时测定、浑浊样品分析、消除背景干扰和加强光谱的精细结构以及复杂光谱的辨析等方面，导数分光光度法在一定程度上解决了普通分光光度法难于解决的问题。导数光谱最大的优点是分辨率得到了很大的提高：(1) 能够分辨两个或两个以上完全重叠或以很小波长差相重叠的吸收峰；(2) 能够分辨吸光度随波长急剧上升时所掩盖的弱的吸收峰；(3) 能够确认宽阔吸收带的最大吸收波长。 一. 基本原理 从上式可以看出各阶导数始终和试液浓度C呈直线关系，这是导数分光光度定量分析的基础。 a: 吸收光谱; b-d: 一至四阶导数光谱 描述导数曲线的方程式可由朗伯-比尔耳定律推出。 式（1）中I0，I分别为入射光强度和透射光强度，为摩尔吸光系数，为吸收池厚度，C为待测组分浓度。假定入射光强度在整个波段范围内保持定值，对式（1）作一次微分处理得到一阶导数方程， 式（2）中，I和是波长的函数，I的一阶导数值与浓度成线性关系。灵敏度（一阶导数值的大小）决定于摩尔吸光系数对波长的变化率，最大时，灵敏度最大。 对式（1）作二次微分处理，得 从式（3）可知，当时，I的二阶导数值与浓度呈线性关系。同理，对式（6.1）作三次和四次微分处理得： 从式（4）可知，对三阶导数， =0时，I的三阶导数值与浓度成正比；对四阶导数，则必须满足 =0和 =0两个条件，才能使四阶导数与浓度成正比。这就为我们利用导数光谱做定量分析时，正确选择波长提供理论依据。在通常情况下，四阶导数即可获得极佳的分辨率，并保持较高的信噪比，因此在采用导数分光光度法测定时，导数的阶数一般选择n ≤4。 如何绘制导数吸光度光谱？ 二．获得导数光谱的方法 (1) 人工作图法：从吸收光谱的数据中每隔一个波长小间隔Δλ（1～2nm），逐点计算出ΔA/Δλ的值： 利用这些数值对波长描绘成图像，就得一阶导数光谱。用类似方法又可从导数光谱中获得高一阶的导数光谱。 (2) 仪器扫描法：用双波长分光光度计以固定Δλ（1～2nm）的两束单色光同时扫描记录样品对两束光吸光度的差值ΔA，便得到样品的一阶导数光谱。 带有微处理机的分光光度计，利用它的记忆和处理数据的功能，可直接存储吸收光谱的数据并加以处理，可描述一阶、二阶……等各阶的导数光谱。 导数分光光度法是如何消除背景干扰的？ 无论干扰组分吸收曲线形状如何，都可以用一个近似的幂级数来表示 根据吸光度加合性原理，两组分共存时，有下式 其一阶导数为 其二阶导数为 当干扰组分为一次吸收曲线时， 说明一阶导数可以消除线形干扰吸收 当干扰组分为一次吸收曲线时， 说明二阶导数可消除二次干扰吸收 三．导数光谱的测量方法及影响因素 导数输出信号与待测组分的浓度有现性关系是定量分析的基础。实际工作中是通过对导数曲线的测量来确定导数值，常用于测量导数值的方法有以下几种。 1. 切线法 对相邻两峰（谷）作切线，测量两峰间的谷（峰）至切线间的距离（图中的b线）此法适合于有线性背景的情况，只要基线平直，不论其是否倾斜，都能得到正确的结果。 2. 峰-峰法 通过测量相邻峰谷间的距离来进行定量分析（图中的a或c线），这是最常用的方法，灵敏度高。也可测量相邻峰值比的方法，如图中a/c值，又称峰-峰比法。 3. 峰-零法 在基线平直条件下，测量峰至基线间的距离，如图中的d线。此法灵敏度较低，但选择性较好，测量精度较高。 4. 面积法