细胞周期调控2幻灯片.pptx

细胞周期调控;促成熟因子MPF的发现 Cyclin-Cdk复合物的多样性及细胞周期运转 细胞周期运转的阻遏(细胞周期运转的负调控) 细胞周期检验点(Cell Cycle Checkpoint) ;;DNA的复制，G1/S之间。 染色质凝集，G2/M之间。→研究切入点;促成熟因子MPF的发现及其生化实质 MPF(Maturation-promoting factor)早期叫M期促进因子(Mitosis-promoting factor) ? 细胞融合与染色体超前凝集 (PCC) ? 爪蟾卵子成熟过程与MPF的发现 ? MPF的本质 MPF的活化与功能;细胞融合实验—PCC现象;不同类的M期细胞也可以诱导PCC产生，如人和蟾蜍的细胞融合时同样有这种效果。 结论：M期细胞具有某种促进间期细胞进行分裂的因子。 下一步工作：这种/些因子是什么？→爪蟾卵细胞实验研究;Model Organisms for 细胞周期研究;爪蟾早期胚胎细胞的细胞周期;蛙卵细胞的发育过程;1960s，Yoshio Masui（下图）发现成熟蛙卵的提取物能促进未成熟卵的胚胞破裂(Germinal Vesicle Breakdown，GVBD)，称为促成熟因子，MPF。 在成熟的卵母细胞中。MPF已经存在，但是无活性，需要翻译后修饰才能活化。;MPF是一种General 细胞周期调节因子;酵母研究 Leland Hartwell在出芽酵母中发现cdc28 Paul Nurse在裂殖酵母中发现cdc2 海胆卵研究 爪蟾MPF的纯化;酵母细胞的细胞周期;分离出芽酵母温敏突变体（Temperature Sensitive Yeast Mutants）;Nurse(1970s)在裂殖酵母中发现cdc2;Leland Hartwell在出芽酵母中发现cdc28;Tim Hunt(1983)的海胆卵细胞实验研究发现Cyclins;1988，James Maller and Manfred Lohka of UC Health Sci., Denver. 终于纯化出微克级MPF。 MPF含有两个亚单位p32（ 分子量32 kDa ）和p45（ 45 kDa ），两个亚单位结合后具有蛋白激酶活性，可使多种蛋白底物磷酸化。 最终确认： p32（ 分子量32 kDa ），a protein kinase p45（ 45 kDa ），a regulatory subunit MPF Autophosphorylates its 45 kDa component;Structrure of Protein Kinase;进一步研究发现cdc2（ p34，裂殖酵母）和cdc28（ p34，出芽酵母）均是蛋白激酶，两者为同源物。 于是研究MPF与cdc2和28之间的关系。 Maller和Paul Nurse合作（1990）实验证明MPF中的p32实际上是p34CDC2的同源物。 Maller和Hunt合作实验证明MPF中的p45是cyclinB，与酵母p56cdc13为同源物。 从而将细胞周期三个领域的研究联系在一起，最终确认了MPF的本质。 ;MPF就是一种cyclin-dependent kinase (CDK);活化 随Cyclin浓度变化而变化 激酶与磷酸酶的调节， 活化的MPF可使更多的MPF活化 功能：启动细胞从G2期进入M期的相关事件;MPF活性随Cyclin浓度变化而变化;CDK1的激酶与磷酸酶的调节与活化;活化的MPF的正反馈调节;MPF功能;Cyclin-Cdk复合物的多样性 Cyclin-Cdk---调控细胞周期的引擎：不同的周期蛋白与不同的CDK结合，构成不同的Cyclin-Cdk； 不同的Cyclin-Cdk在不同的时相表现活性，影响不同的下游事件。 ? CDK ? CKI ? Cyclins ? Cyclin-CDK复合物 Cyclin-Cdk复合物对细胞周期运转的调控;CDK ;CKI;周期蛋白不仅仅起激活CDK的作用，还决定了CDK何时、何处、将何种底物磷酸化，从而推动细胞周期的前进。 目前从芽殖酵母、裂殖酵母和各类动物中分离出的周期蛋白有30余种，在脊椎动物中为A1-2、B1-3、C、D1-3、E1-2、F、G、H等。 不同cyclins在细胞周期中表达时相不同，调节相应CDK活性(图11-34)。因此，分为G1型、G1/S型、S型和M型4类。;均含有一段约100个氨基酸的保守序列，称为周期蛋白框（cyclin