任务三 组培快繁技术.ppt

继代培养时材料的玻璃化 实践表明，当植物材料不断地进行离体繁殖时，有些培养物的嫩茎、叶片往往会呈半透明水渍状，这种现象通常称为【玻璃化】。出现玻璃化的嫩茎不宜诱导生根，而且其茎、叶表面无蜡质，体内的极性化合物水平较高，细胞持水力差，植株蒸腾作用强，无法进行正常移栽。它的出现会使试管苗生长缓慢、繁殖系数有所下降。玻璃化为试管苗的生理失调症。 其具体解决的方法为： ①增加培养基中的溶质水平，以降低培养基的水势； ②减少培养基中含氮化合物的用量； ③增加光照； ④增加容器通风，最好进行CO2施肥，这对减轻试管苗玻璃化的现象有明显的作用； ⑤降低培养温度，进行变温培养，有助于减轻试管苗玻璃化的现象发生； ⑥降低培养基中细胞分裂素含量，可以考虑加入适量脱落酸。 四、快繁过程中出现的问题及解决办法 （一）初代培养时期 （二）继代培养时期 （三）生根培养时期 （四）污染 培养物的不良表现及改进措施（生根培养） 不良表现 可能原因 改进措施 培养物久不生根，基部切口没有适宜的愈伤组织 生长素种类、用量不适宜；生根部位氧气不良；生根程序不当；PH值不适，无机盐浓度及配比不当 改进培养程序，选用适宜的生长素或增加生长素用量，适当降低无机盐浓度，改用滤纸桥液培养生根等 愈伤组织生长过快、过大，根茎部肿胀或畸形，几条根并联或愈合 生长素种类不适，用量过高，或伴有细胞分裂素用量过高，生根诱导培养程序不对 调换生长素种类或几种生长素配合使用，降低使用浓度，附加VB2或PG等减少愈伤，改变生根培养程序等 四、快繁过程中出现的问题及解决办法 （一）初代培养时期 （二）继代培养时期 （三）生根培养时期 （四）污染 1、细菌污染特点-菌斑呈黏液状，接种后1-2天发现。 污染途径： 外植体带菌 培养基及器皿灭菌不彻底 操作人员未遵守操作规程 2、真菌污染的特点-污染部分长有不同颜色的霉菌，接种后3-10天发现。 污染途径： 周围环境不清洁 超净工作台过滤装置失效 培养瓶的口径过大 * 重要环节，做不好会前功尽弃，所以要选择合适的基质，配合相应的管理措施，才能保证整个组培工作顺利完成 * 重要环节，做不好会前功尽弃，所以要选择合适的基质，配合相应的管理措施，才能保证整个组培工作顺利完成 * 重要环节，做不好会前功尽弃，所以要选择合适的基质，配合相应的管理措施，才能保证整个组培工作顺利完成 * 3、生根培养 当材料增殖达到相当的数量之后，则应考虑使其中一部分转入生根阶段。若不能及时将培养物转到生根培养基上去，就会使久不转移的苗子发黄老化，或因过分拥挤而使无效苗增多造成抛弃浪费。从某种意义上讲，增殖只是贮备母株，而生根才是增殖材料的分流，生产出成品。诱导生根的方法有： 1）将新梢基部浸入50或100×10-6 IBA溶液中处理4—8h； 2）在含有生长素的培养基中培养4-6d； 3）直接移入含有生长素的生根培养基中。 上述三种方法均能诱导新梢生根，但前二种方法对新生根的生长发育则更为有利。而第三种对幼根的生长有抑制作用。也可采用延长在增殖培养基中的培养时间以及减少细胞分裂素的用量，有意降低一些增殖倍率(即将增殖与生根合并为一步)的方法生根；另外少数植物生根比较困难时，则需要在培养基中放置滤纸桥，使其略高于液面，靠滤纸的吸水性供应水和营养，从而诱发生根。 主要内容 外植体选择与处理 1. 外植体培养 2. 试管苗驯化移栽 3. 快繁过程中出现的问题及解决办法 4. 三、试管苗驯化移栽 （一）试管苗的特点 1、生态环境 无菌 有营养供给 适宜光照 适宜温度 100%相对湿度 CO2 H20 Light C2H4 O2 Microbes ? Temperature 炼苗措施： 控水、减肥、增光、降温等措施 使试管苗逐渐适应外界环境，从而使生理、形态、组织上发生相应变化，使之更适合自然条件，保证试管苗顺利移栽成活。 三、试管苗驯化移栽 （一）试管苗的特点 2、试管苗特点 叶片的角质层不发达，没有表皮毛、或较少，叶片上有大量水孔，气孔的数量也超过普通苗。更适应高湿的环境。 炼苗措施：外界增加湿度、减弱光照；试管内气体通透，增施二氧化碳肥，逐步降低空气湿度；对栽培驯化基质要进行灭菌，以提高成活率。 三、试管苗驯化移栽 （二）基质选择 适合于栽种试管苗的基质要具备透气性、保湿性和一定的肥力，容易灭菌处理，并不利于杂菌滋生的特点，一般可选用珍珠岩、蛭石、砂子等。为了增加粘着力和一定的肥力可配合草炭土或腐殖土。配时需按比例搭配，一般用珍珠岩，蛭石，草炭土或腐殖土比例为1:1:0.5。也可用砂子：草炭土或腐殖土为1:1。这些介质在使