第十四章真菌检验技术.pptVIP

《微生物学检验》 国家卫生和计划生育委员会规划教材 国家卫生和计划生育委员会规划教材 微生物学检验 第十四章真菌检验技术 返回总目录 本 章 内 容 第一节 真菌形态检验技术 1 第二节 真菌培养技术 2 第三节 真菌的鉴定方法 3 第四节 真菌药物敏感试验 4 学习目标及重点 学习目标： 掌握真菌的检验方法 熟悉真菌标本采集及注意事项；真菌的鉴定程序；真菌药物 敏感试验方法 了解常用抗真菌药物 本章重点： ★临床真菌标本的采集和处理 ★真菌的形态学检查、培养技术和鉴定试验 ★真菌药物敏感试验 第一节 真菌形态检验技术 一、标本的采集和处理 1. 标本的采集——根据真菌感染部位采集不同的标本 取毛发、皮屑、指（趾）甲等标本 取痰液、脓汁、血液、脑脊液等标本 深部真菌感染 浅部真菌感染 标本来源要适宜 用药前采集标本 严格无菌操作 标本量要充足 立即送检 2. 标本采集注意事项 第一节 真菌形态检验技术 临床标本 分离培养 直接检查 免疫学检查 观察菌落 生化反应 染色 镜检 直接 镜检 3. 检验程序 核酸检测 其他鉴定试验 形态学检查 病理组 织标本 动物实验 镜检 PAS HE 第一节 真菌形态检验技术 二、直接镜检 标本处理液： （1）KOH溶液 适于检查致密的难以透明的材料 （2）生理盐水 用于观察真菌的出芽现象 （3）水合氯醛-石炭酸-乳酸封固液 透明力较强，只限于不透明的标本 镜检 （加温） 毛发或皮屑等 注意真菌与其他混杂物的鉴别 标本+标本处理液 第一节 真菌形态检验技术 三、染色镜检 革兰染色：各种真菌均为革兰阳性（图1） 乳酸酚棉蓝染色：染成蓝色（图2） 墨汁染色：背景染成黑色，菌体不着色（图3） 荧光染色：荧光显微镜下发出荧光 糖原染色：多糖成分呈红色，核为蓝色，背景为淡绿色 返回章内容 （图1） （图3） （图2） 第一节 真菌形态检验技术 第二节 真菌培养技术 一、基本条件 1.常用工具 平皿、试管、接种针、接种环、接种钩、培养箱等 一、基本条件 2.培养基 真菌营养要求不高，最适pH 4.0～6.0 常用的培养基: 培养基名称 培养基用途 沙氏培养基 真菌的常规培养 放线菌酮-氯霉素琼脂 真菌的常规培养 玉米粉吐温-80琼脂 观察白假丝酵母菌的厚膜孢子 马铃薯葡萄糖琼脂 观察真菌菌落色素，用于鉴别 尿素琼脂 生化反应鉴别培养（红色癣菌和石膏样癣菌） 心脑浸液葡萄糖血琼脂 显色鉴定培养基 深部真菌培养 真菌的培养与鉴定 第二节 真菌培养技术 显色鉴定培养基 真菌特异性酶的底物（无色） 产色基团 代谢基质 产色基团游离（显色） 真菌的酶 分解代谢基质 原理 第二节 真菌培养技术 白色念珠菌： 热带念珠菌： 克柔念珠菌： 光滑念珠菌： 近平滑念珠菌： 蓝绿色 蓝灰色、铁蓝色 粉红色 紫色 白色? 第二节 真菌培养技术 二、培养方法 仅用于培养生长繁殖较快的真菌 观察真菌结构及生长发育过程 多用于菌种传代接种与保存 试管培养法 大培养法 小培养法 玻璃棒 载玻片 培养基 盖玻片 无菌蒸馏水 第二节 真菌培养技术 三、生长现象 类酵母型菌落 丝状菌落 观察菌落 生长速度、菌落大小、表面形态、性质、颜色、边缘、底部等 酵母型菌落 返回章内容 第二节 真菌培养技术 检测真菌对单糖、多糖、醇类等发酵情况 糖（醇）类 发酵试验 检测真菌对糖类中的碳源利用能力的试验，主要用于鉴定酵母菌 同化碳源试验 检测真菌对氮源利用能力的试验，主要用于鉴定酵母菌 同化氮源试验 某些真菌具有明胶酶，可分解明胶蛋白，使其失去凝胶性质而不能凝固 明胶液化试验 某些真菌具有尿素酶，可分解尿素 尿素分解试验 一、常用生化试验 第三节 真菌的鉴定方法 二、免疫学检查 提取真菌抗原，进行皮内注射或斑贴试验，观察注射或试验部位有无红肿硬结出现 皮肤试验 检测真菌的抗原或抗体，例如：胶乳凝集试验、酶联免疫吸附试验、免疫荧光技术、放射免疫分析等 血清学检测 第三节 真菌的鉴定方法 三、其它鉴定诊断方法 l. 厚膜孢子形成试验 接种 玉米粉吐温-80琼脂 25℃孵育1～3天 待测菌 每天于显微镜下观察 应用：白假丝酵母菌的鉴定 方法： 结果：白假丝酵母菌在72小时内可观察到丰富的假菌丝，假菌丝顶端见1～2个厚膜孢子 厚膜孢子 假菌丝 第三节 真菌的鉴定方法 2.芽管形成试验 方法： 待测菌+0.5～1ml血清 37℃水浴2～3小时 镜检 应用：白假丝酵母菌的鉴定 三、其它鉴定诊断方法 结果：绝大部分白假丝酵母菌可形成典型的放大