流式细胞仪的技术原理及其在生命科学领域的应用.ppt

* * * * * * -*- DNA含量分析 70%人类癌症中存在着异倍体或细胞周期的改变 DNA倍体和S期比例--指导治疗[2] 卵巢癌，乳腺癌，结肠癌，子宫内膜癌，原发部位不明的癌症 --早期 (I/II期) DNA倍体和DNA指数--预后长期和无病生存期[2] 卵巢癌--晚期 -*- 肿瘤多药耐药性(MDR)检测 P-gp在肿瘤组织中的表达 乳腺癌, 膀胱癌, 胃癌, 食管癌, 卵巢癌, 前列腺癌等 化疗前高表达 化疗后高表达 肾细胞癌, 结肠癌, 肝癌,肾上腺皮质癌, 胰腺癌等 化疗前低表达 非何杰金氏淋巴瘤, 成神经细胞瘤, 急性髓白血病等 化疗不敏感 化疗敏感 化疗不敏感 -*- 乳腺癌 石蜡切片 脱腊 ER(雌激素受体) ER抗体染色 酶解 流式检测 固定(多聚甲醛) 破膜(70%甲醇) 细 胞 -*- 细 胞 凋 亡 -*- DNA断裂 -*- Fas/FasL (CD95/CD95L) T细胞与T细胞之间的凋亡 T淋巴细胞与靶细胞间的凋亡 靶细胞与靶细胞之间的凋亡 -*- 乳腺癌 Fas/FasL与疾病 慢性病毒性肝炎 恶性肿瘤细胞-黑色素瘤、结肠癌、肺癌、肝癌等 脑缺血后细胞凋亡 自身免疫性疾病—系统性红斑狼疮 Fas/FasL(CD95/CD95L) -*- 乳腺癌 Caspases 早期细胞凋亡 Annexin V/PI -*- 移植免疫 -*- CD25高于正常值5-10%, 表明即将或已发生排斥 CD4/CD8比值下降提示并发凶险感染 0.2时, 必须停用免疫抑制剂 CD2+HLA-DR+增加5-10%, 且不伴有CD25的增加 提示巨细胞病毒感染 移植后免疫监测 -*- 血小板 -*- 血小板活化 静止血小板 活化血小板 -*- 血小板活化 -*- HLA-B27 -*- 正常人 患 者 HLA-B27 -*- 细胞介导的细胞毒作用 活靶细胞 死靶细胞 替代51Cr释放实验 关于流式细胞仪几个检测参数的解释与分析技巧 -*- -*- FITC and PE emission spectra PE FITC -*- Compsensation Green Fluorescence (FITC) Red Fluorescence (PE) -*- Uncompensated Compensated Overcompensated Compensation -*- -*- 041895029 NOISE =183 3 μg REAGENT SIGNAL = 454 S/N=2.48 PE CD21 - 0 256 512 768 1024 ISOTYPE CONTROL SIGNAL = NIL NOISE =62 S/N=NONE 041895025 PE CD21 - 0 256 512 768 1024 041895026 PE CD21 - 0 256 512 768 1024 041895027 PE CD21 - 0 256 512 768 1024 041895028 PE CD21 - 0 256 512 768 1024 1 μg REAGENT SIGNAL = 404 NOISE =214 S/N=1.88 0.3 μg REAGENT SIGNAL = 459 NOISE =209 S/N=2.20 0.1 μg REAGENT SIGNAL = 454 NOISE =149 S/N=5.24 谢谢各位同仁的参与！有问题可与我（陈勇）联系，本人QQ：784072040 -*- * * * * * * * * 14 * 17 -*- （三） 流式细胞仪分析数据常见图形：1. （二维）点陈图/散点图 (Dot Plot) 适用于：双参数分析 -*- （三） 流式细胞仪分析数据常见图形： 点图分析(dot plot) -*- （三） 流式细胞仪分析数据常见图形： 2. 直方图(Histogram Plot) 适用于： 单参数分析 -*- （三） 流式细胞仪分析数据常见图形 直方图分析(histogram) -*- （三） 流式细胞仪分析数据常见图形： 等高图和密度图分析(density plot) -*- 散点图 密度图 二维等高图 直方图 图 报告中常见的几种流式细胞图 -*- 图 双标记分析小鼠脾细胞中T细胞亚群 -*- 流式细胞术检测细胞的荧光 标记方法 单标： 一种单抗 : FL1, FSC, SSC（三参数） 双标： 两种单抗：FL1, FL2, FSC, SSC（四参数） 三标