Bα基因转染肝癌细胞Hep G2的辐射增敏作用.ppt

讨 论 mIκBa基因转染Hep G2细胞后放射敏感性的变化 细胞存活曲线以及转染mIκBa组肝癌细胞辐射增敏比3.2来看，mIκBα基因确实存在增加HepG2细胞对放射线的敏感性的作用。 mIκBa基因转染Hep G 2细胞后细胞放射敏感性的增加主要是通过细胞凋亡途径而产生 Hep G2/Ad-mIκBα组与Hep G2组、Hep G2/Adv组细胞凋亡率的显著性差异(P0.01)，极可能是由于外源性mIκBα导致的，这也就是该组细胞具有的放射增敏效应的原因。 推测其机理与外源性mIκBα基因表达产物封闭NF-κB活性及PCNA蛋白降解有关 外源Iκα蛋白得到较高的表达，这种表达可能是导致放射敏感性差异的分子生物学基础。 照射后IκBα蛋白量下降，这可能是由于辐射诱导NF-κB活性升高，负反馈抑制IκBα蛋白所致。 Hep G2/Ad-mIκBa组细胞始终保持较高的IκBα蛋白表达。 Hep G2/Ad-mIκBα组照射前未见NF-κB活化，照射后1，12，24h 亦未见其活化，说明由于转染mIκBα后细胞内持续表达，高活性的IκBα已几乎完全覆盖了NF-κB活性；而Hep G2/Adv组及Hep G2组照射前NF-κB见轻度活化，说明细胞属于基本正常的代谢状况，照射后1h 二组NF-κB活性均明显增加，与放射线的诱导有关；照射后12h、24h 两组活性较之照射后1h有所减弱似乎不能与IκBα蛋白表达对应解释 PCNA(增殖细胞核抗原)与细胞周期及细胞增殖状态有明显关系，G0/G1期细胞无明显的PCNA表达，G1晚期合成增加，S期达高峰。组织分化低，恶性程度高，细胞增殖率高，PCNA阳性率显著增高。此蛋白是聚合酶δ相关蛋白，在S期早期，PCNA呈散在颗粒状分布在细胞核内，在DNA合成后期，细胞核内可见大量的PCNA分布。本实验通过检测照射前后肝癌细胞PCNA表达率发现： 照射前Hep G2/Ad-mIκBα组PCNA阳性率为20%，低于Hep G2/Adv组（35%）及Hep G2组（38%），与Hep G2/Adv组比较,差别有显著性(X2=5.64,P0.05)，与Hep G2组比较，差别有非常显著性(X2=7.86，P0.01)，说明mIκBα的表达可能影响PCNA阳性率；Hep G2/Adv组与Hep G2组比较，差别无显著性(X2=0.19，P0.05)。Hep G2/Adv组、Hep G 2组照射后与照射前相比较PCNA阳性率差别有显著性(P0.05)，； Hep G2/Ad-mIκBα组PCNA阳性率在照射后明显减少(P0.01)，此结果与文献报告相符。 NF-κB、IκBα与PCNA是否存在分子生物学联系目前尚不清楚，从本实验结果分析可能存在一定关系。由于Wt p53对DNA损伤剂诱导的肿瘤细胞凋亡是必不可少的[91] ， NF-κB在p53介导的细胞死亡中有极其重要的地位[31，88]，而p53和PCNA又都参与细胞的增殖过程和细胞周期调控。因此PCNA可能借p53作为桥梁与NF-κB形成相关联系。 结论： 1．腺病毒载体AdEasy 系统易于构建含目的基因的腺病毒质粒，其腺病毒颗粒有很高的感染率，目的基因在此系统中可以高效表达。 2．mIκBα基因可以诱导Hep G 2细胞凋亡。 3．mIκBα基因转染可以增加Hep G 2细胞的放射敏感性，这种作用主要是通过细胞凋亡途径产生的，推测其机理可能与外源性mIκBα基因表达产物封闭NF-κB活性及PCNA蛋白降解有关。 Thanks mIκBα基因转染肝癌细胞（Hep G2）的辐射增敏作用 Enhancement of radiosensitivity in Hep G2 cells by a mutant IκBαgene  transfection 核因子κappa B（NF-κB）是近十多年来发现的重要转录因子，它与细胞的增生、分化和凋亡关系密切，与肿瘤的发生、发展密切相关。 介导肿瘤形成和转移的癌基因受转录因子NF-κB的调节。这些基因主要有Bcl-2、Bax、Bcl-x1、p53、c-myc等。 IκB（inhibitor κB）是NF-κB的抑制蛋白。在稳定分子及抑制NF-κB与DNA结合中发挥作用。 IκBα是IκB家族中对NF-κB抑制最强的蛋白， NF-κB能上调IκBα，使IκBα通过自身反馈环路来调节NF-κB活性。 突变型IκBα(mIκBα)是IκBα的突变体，它较IκBα更为稳定，当其与NF-κB结合后，可形成稳定的二聚体。 IκBα蛋白主要功能 ①阻止NF-κB转移入核； ②