研究生课 细胞周期调控与p53系列研究 细胞生物学课.ppt

* * * * * * 总结一句对学科的推动作用或者科学意义 * Apak如何选择性调控p53凋亡相关靶基因的表达 Apak 利用CAST技术筛选Apak结合的DNA保守序列 保守序列：TCTTN2-30TTGT 利用CAST技术筛选Apak结合的DNA保守序列 P53 binding Consensus PuPuPu-C(A/T)(A/T)G-PyPyPy Apoptosis p53AIP1 CCTCCTCTCTTGCCCGGGCTTGTCGAGATG p53AIP1 CCTCCTCTCTTGCCCGGGCTTGTCGAGATG Bax GGGCTCACAAGTTAGAGACAAGCCTGGGCG Puma CGCGCCTGCAAGTCCTGACTTGTCCGCGGC Cell-cycle arrest GADD45 GTACAGAACATGTCTAAGCATGCTGGGGAC p21 GTCAGGAACATGTCCCAACATGTTGAGCTC p53靶基因中p53AIP1的内含子特异地含有Apak结合元件且与p53结合元件部分重叠 Free probe Super shift Apak/p53-BS + + + Myc-Apak + + + Apak-Ab - + - Competitor - - + Apak-DNA EMSA 1 2 3 B Apak/p53-BS + + + His-Apak - + + Competitor - - + 1 2 3 Apak-DNA Free probe EMSA A IP C 10% Input Normal IgG Apak 1 2 3 p53AIP1 D Apak结合p53AIP1的内含子 在细胞内Apak参与p53AIP1 基因的结合 体外实验表明Apak直接与p53AIP1 基因p53应激元件结合 Apak/p53-BS + - - - Mut4 - + - - Mut5 - - + - Mut6 - - - + His-Apak + + + + E Free probe Apak-DNA EMSA 1 2 3 4 Apak/p53-BS + + - - - Mut4 - - + - - Mut5 - - - + - Mut6 - - - - + GST + - - - - GST-p53 - + + + + pAb421 + + + + + F p53–DNA complexes Free probe 1 2 3 4 5 Apak结合p53蛋白与DNA对锌指的需求不同 A B p53 - + + + Apak - - + ++ p53 Apak β-actin Apak/p53-BS + - - Mut7 - + + GST - - + GST-p53 + + - pAb421 + + + D p53–DNA complex Free probe 1 2 3 4 Apak/p53-BS + + - - Mut7 - - + + His-Apak - + - + C Free probe Apak-DNA 1 2 3 EMSA E p53 - + + Apak - - + p53 F + ++ β-actin Apak Apak利用其DNA结合能力抑制p53AIP1转录 Apak抑制p53激活的p53AIP1 基因的转录 不能参与DNA结合的Apak丧失抑制功能 Mutant 7丧失Apak的结合能力，但仍结合p53 Apak与p53直接竞争结合p53AIP1内含子 Apak特异结合p53AIP1内含子 Apak对p53AIP1基因的调控效应显著高于其他基因 DNA损伤条件下，Apak与p53AIP1基因解离 DNA损伤条件下，Apak从核质向核仁移位 p53 ATM Apak Ac Puma Bax p53AIP1 Noxa p53 ATM Apak p53AIP1 Apak选择性调控p53下游凋亡基因的机制 p53 靶基因 细胞学效应 Puma Bax p53AIP1 Noxa fas PIGs Siah-1 scotin SCO2 DRAM Sestrins PTEN LIF 细胞凋亡 周期阻滞 细胞代谢 衰老/生殖发育 14-3-3? Gadd45 p21 B99 TIGAR GAMT KAI PAI BAI-1 TSP1 血管生成与转移抑制 KZNFb KZNF家族调控分子 Apak KZNFa KZNFd KZNFc KZNF家族选择性负调控p53介导的细胞学效应 Modified model of p53 activation Jan-Philipp Kruse an