动物细胞工程教学课件.ppt

能否用植物组织培养的方法使动物细胞发育成动物个体？ 不能。动物细胞和组织在体外培养的过程中，伴随一定的组织分化，不管采用什么手段和培养条件，由于细胞的运动、变化，细胞发生结构功能变异，结果长时间的培养只能使单一类型的细胞保存下来，最终成了简单的细胞培养。 (动物细胞培养有没有用到全能性？我们先来看一下动物细胞的全能性！……可以看到这是动物细胞培养，培养细胞的，并没有体现出全能性！那么动物细胞培养的原理是什么呢？ * 动物细胞培养的流程：取动物组织块→剪碎组织→用胰蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养液中进行原代培养→贴满瓶壁的细胞用胰蛋白酶处理分散成单个细胞，制成细胞悬液→转入培养液中进行传代培养→放入二氧化碳培养箱中培养。 * 贴壁生长：动物细胞在液体培养基中悬浮生长一段时间之后，大部分细胞会贴附在培养瓶的表面生长。也有一些细胞（如淋巴细胞）能够持续在悬浮状态下生长，这些能长期悬浮生长的细胞容易进行大规模细胞培养，生产大量的动物细胞及其产物。 * ②接触抑制：细胞有丝分裂，数目增加到表面相互接触时，停止分裂增殖，这种现象称为接触抑制。 * 原代培养：将组织取出来后，剪碎，用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理一段时间，使组织分散成单个细胞。然后，用培养液将分散的细胞稀释制成细胞悬液，再将细胞悬液放入培养瓶中，置于适宜环境中培养。这个过程称为原代培养，也有人把第一代细胞的培养与10代以内的细胞培养统称为原代培养。 (3)、传代培养。将原代培养增殖的细胞定期用胰蛋白酶把细胞从瓶壁上脱离出来，配制成细胞悬液，分装到两个或两个以上的培养瓶中培养的过程。 * 细胞株和细胞系的区别： 细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。 * 动物细胞培养的流程：取动物组织块→剪碎组织→用胰蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养液中进行原代培养→贴满瓶壁的细胞用胰蛋白酶处理分散成单个细胞，制成细胞悬液→转入培养液中进行传代培养→放入二氧化碳培养箱中培养。 * 主要成分：（葡萄糖、氨基酸）、（水、无机盐）、维生素和动物血清等。独特之处有：1、液体培养基 2、成分中有动物血清等 * 一般来说，动物细胞体外培养需要满足以下条件 (1)、无菌、无毒的环境：首先应保证被培养的细胞处于无菌、无毒的环境，即对培养液和所有的培养用具进行无菌处理。通常还要在培养液中添加一定量的抗生素以防培养过程中的污染。定期更换培养液以清除代谢产物，防止对培养细胞造成危害。 (2)、营养物质：细胞体外培养所需营养物质与体内基本相同，需要有葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。通常还需加入血清、血浆等一些天然成分。液体合成培养基 (3)、温度和pH：细胞体外培养的适宜温度一般与动物的体温相近为36.5±0.5℃。多数细胞生存的适宜pH为7.2～7.4。 (4)、气体环境：细胞培养所需气体主要有O2和CO2，O2是细胞代谢所必需的，CO2的主要作用是维持培养液的pH。进行细胞培养时，通常采用培养皿或松盖培养瓶，将其置于含95%空气加5% CO2的混合气体的培养箱中进行培养。 * 动物细胞培养技术有很多用途： （1）许多有重要价值的生物制品，如：病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等，都可以借助动物细胞的大规模培养来生产。 （2）与基因工程相结合； （3）有毒物质的检测，原理是用添加待检测物质的培养基培养细胞，根据培养细胞中发生染色体变异的细胞占总培养细胞的比例而推测该物质的毒性。 * 动物细胞培养与植物组织培养的区别： 动物细胞培养与植物组织培养有许多相似之处，也有许多不同点。 第一是它们用的培养基不同，植物组织培养用的一般是固体培养基，而动物细胞培养用的一般是液体培养基。 第二是它们的培养基的成分不同。动物细胞培养的培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐和维生素，另外还有动物血清。植物组织培养所需要的培养基包含植物生长和发育的全部营养成分，如矿质元素、蔗糖、维生素、植物激素和有机添加物，没有动物血清。 第三是植物组织培养最后一般得到新的植物个体，而动物细胞培养因为动物体细胞一般不能表达其全能性，因此得到的是同一种的细胞。 第四是培养的原理也不同，植物组织培养的原理是植物细胞的全能性，而动物细胞培养的原理主要是细胞的增殖。 * 动物细胞培养的流程：取动物组织块→剪碎组织→用胰蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养液中进行原代培养→贴满瓶壁的细胞用胰蛋白酶处理分散成单个细胞，制成细胞悬液→转入培养液中进行传代培养→放入二氧化碳培养箱中培养。 * 卵母细胞：体积大，易操作。含有促使细胞核表达全能性的物质和营养条件。 * 体细胞核移植技术的应用前景 （1）在畜牧业生产中，利用体细胞克隆技术可以加速家畜遗传改良进程，促进良