小鼠腹腔巨噬细胞的制备及其功能观察课件.ppt

小鼠腹腔巨噬细胞的制备及其功能观察 实验动物 实验动物Vs实验用动物 特征 遗传背景明确 对微生物和寄生虫实施控制 在特定环境下进行人工饲育 实验动物是生命科学研究中常用的“活的精密仪器”，是标准化的工具 实验动物在法规和技术层面与其他类动物不同 ↓ 遗传背景明确 近交系（inbred strain） 封闭期（closed colony） 杂交群（hybrid colony） 对微生物和寄生虫实施控制 普通动物（conventional animal，CV） 清洁级动物（clean animal，CL） 无特定病原体级动物（special pathogen free animal，SPF） 无菌级动物（germ free animal，GF） 在特定的环境条件下进行人工饲育 普通环境（open system） 屏障环境（barrier system） 隔离环境（isolation system） 小鼠的抓取和固定 ① 抓住鼠尾并提起 ② 放在笼盖或较粗糙的台面上 ③ 抓住小鼠两耳和头颈部皮肤 ④ 压紧尾巴和后肢 ① ② ③ 小鼠几种常见的固定方法 背景 机体免疫 巨噬细胞的功能 吞噬 趋化（定向移动）和接触 入胞作用 细胞内异物的处理 实验用品 实验材料 小鼠、蟾蜍红细胞悬液 器材 显微镜、低速离心机；眼科剪、眼科镊，注射器、吸管、离心管等 试剂 PBS溶液 4%台盼蓝溶液 6%淀粉肉汤（用时加入台盼蓝） 4% NaHCO3溶液 实验步骤 取小鼠（未提前注射淀粉肉汤），注射蟾蜍红细胞悬液0.5ml。（可注射不同的异物） 入针部位在腹部后1/2处 实验步骤 20-30分钟后，用CO2麻醉后再以颈部脱臼法处死小鼠。 （可做一些处理时间上的对照） 以酒精棉球润湿小鼠腹部的表皮。 用镊子提起表皮，用剪子剪一个“T”型切口（注意不要剪破腹膜）。 ↓ ↓ 实验步骤（续） ↓ ↓ 用5ml注射器，向小鼠的腹腔内注射3-4ml（根据小鼠大小来确定）PBS溶液。（注意不要弄伤脏器）。 轻揉小鼠腹部几分钟。 将小鼠的腹膜切开一个小口，用吸管吸出腹腔渗出液，置于试管中。 用4% NaHCO3溶液调渗出液的PH值至7.2-7.4。（半滴/ml，边加边晃动试管） 实验结果（部分） 吸取少量细胞悬液制成装片，观察巨噬细胞吞噬蟾蜍（鸡）红细胞的过程。 Figure 13-46 Molecular Biology of the Cell (? Garland Science 2008) 说明 试剂 PBS溶液（加酚红）——四人一份，在试剂台上 蟾 蜍 红 细 胞 悬 液 ——公用，在投影幕布下方 含台盼蓝的淀粉肉汤——公用（有专门的注射器），在投影幕布下方 托盘中的物品： 玻璃吸管 ——用于吸取腹腔液 蓝色吸头 ——用于吸取NaHCO3！ 注 射 器——用于注射蟾蜍红细胞悬液（2ml）及PBS溶液（5ml），请勿混用！ 实验报告 绘图演示或者拍照记录巨噬细胞的吞噬过程 （对所作对照组进行比较分析） 可交电子版实验报告 ↓ 整理 显微镜复原 取腹腔液后，及时将小鼠尸体按要求放置（动物尸体需统一处理）； 及时清理所用报纸等物品，保持台面整洁； 实验结束后，剪刀、镊子、吸管、注射器等物品以洗涤灵彻底清洗，自来水冲洗后，再以去离子水冲洗，请放回托盘中晾干；请将托盘整理干净； 盖玻片、载玻片用洗涤灵洗干净后集中放置（最后一条实验台上的玻片回收缸） ； 蓝色吸头等用毕丢弃。 * *