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实验二 各类生物样品的采集与培养 《病原微生物实验室生物安全管理条例》 第九条 关于病原微生物样本采集 具有与采集病原微生物样本所需要的生物安全防护水平相适应的设备； 具有掌握相关专业知识和操作技能的工作人员； 具有有效的防止病原微生物扩散和感染的措施； 具有保证病原微生物样本质量的技术方法和手段。 样本的来源、采集过程和方法等作详细记录。 国务院第424号令，2004年11月12日起实施 样品的采集要求 采集人员应注意个人防护，不得徒手接触样品； 采集方法视样品种类而异； 采集时间应适当，如环境样品应在喷洒消毒药前、患者样品在给药前采集； 某些样品的采集应无菌操作，所装容器也应无菌； 样品采集信息要填写完整，如要填写样品送检单位，注明采集地点、时间、品名、数量、采集人姓名和单位等；患者标本应附简要简历；尸解标本还应附解剖记录。 样品的种类 环境样品：空气、各种水样、物体表面等。 生物性样品：各种昆虫、动物、患者以及尸体等样品，如患者皮肤、咽拭子（包括嗽口液）、鼻拭子、痰液、呕吐物、血液、尿液、粪便等，可用于病原微生物的分离培养、抗原抗体、核酸的检测。 产品样品：如食品、卫生消毒用品等。 采样流程 材料准备 个人防护 现场采样 保存送检 采样前材料准备 不同样品准备不同的材料，如样品收集管/瓶、细菌样品所需的增菌液与运送液、病毒样品用Hank’s液、灭菌生理盐水运送； 个人防护 三级防护：穿戴工作服、外罩生物防护服、防护帽、防护眼镜、防护口罩、乳胶手套、鞋套等。采样完毕，应立即进行消毒、手和全身清洗。 现场采样：空气样品 处理原则：采样后细菌培养；放置敏感小动物后检测 仪器：空气采样器 撞击式 离心式 气旋式 冲击式 过滤式 静电吸附式 自然沉降法 分 Coriolis μ 气旋式采样器 水样的采集方法 原则：有小不采大、有静不采动 多点采取表面水样 河湖水样品：离岸边2米处，将采样瓶浸入水中，使瓶口位于水面下20~50厘米，距水底15厘米以上，然后打开瓶塞取水样。 Multi-Limnos自动水样采集器 污染物表面采样 生物战剂航弹碎片：用镊子夹取数片置于适当的容器内送检； 树叶草叶：用剪刀从叶柄处剪断，取1到10余片； 物体表面：用普通营养肉汤培养基或生理盐水浸湿的棉签擦拭后装入盛有3~5ml营养肉汤培养基或生理盐水的试管内送检。 土壤的采集方法 取样部位：弹坑中心或附近的表层土壤 取样方式：多点或同一点连续监测采样 取样工具：手动/自动土样掘凿钻 例如：在鼠疫和炭疽等疫源地采样时，常在有鼠骸存在的洞穴处取土10-20g。稍风干后用孔筛去掉石子和碎片，稀释后接种培养、或提取土壤中细菌DNA用于检测。 昆虫与动物样品的采集 飞翔型：如蚊子，用吸蚊管捕捉； 蚤类：用掏蚤勺/管掏出洞，用镊子夹脱脂棉球蘸取，与棉球一起装入加塞采样管中； 蜱：先固定，如用布轻拂使其附着或用倒齿固定在叮咬部位，再用镊子取下或拔出装入采集管中； 死鼠：可装入塑料袋内送检。 患者采样 咽拭子：用带有聚丙烯纤维头的拭子擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，同样将拭子头浸入采样液中，尾部弃去。 鼻拭子：用无菌拭子轻轻插入鼻道内鼻鄂处，保持几秒钟以吸收分泌液后轻旋出。 咽漱液：用灭菌生理盐水约10ml作为洗漱液，让患者咳嗽后，倒入洗漱液，反复洗漱咽部1分钟，收集到一次性的塑料杯中，然后倒入带垫圈的螺口塑料管（10~50 mL）内，旋紧管盖。 痰液：患者深咳后，将咳出的痰液收集于50ml含3ml 采样液的螺口塑料管中。 血液：严格无菌采静脉血，一般成人采血10~15ml，儿童2~5ml，婴儿0.5~2ml，放入加有抗凝剂的无菌螺口容器或培养瓶中送检。 粪便：采集5-10g粪便置于含5-10ml 采样液的螺口塑料管中，严格密封。 第二十一条 高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输 运输高致病性病原微生物菌（毒）种或样本的容器应当密封； 容器和包装材料应当符合三防两耐的要求； 包装上应当印有卫生主管部门规定的生物危险标识、警示语和提示语； 经省级以上卫生或兽医主管部门批准，由2人以上专人护送。 《病原微生物实验室生物安全管理条例》 样品的保存与运送 样品的存运要求 妥善保存：有些样品可加保存液，如疑似霍乱患者的吐泻物，可用碱性蛋白胨水保存；拟做病毒或立克次体检查的组织样品，可保存于50%中性甘油缓冲盐水中。欲进行微生物学检验用的样品，应在4-8℃条件下冷藏保存。 严密包装：采用三层包装系统 专人护送：专人、专车送检 三层包装系统 主容器 辅助包装 外包装 固体撞击式室内空气微生物采样 实习内容 实验目的 学习、掌握固体撞击式室内空气微生物采样器采样的原理、方法及应用 FKC-I型浮游空