人类免疫缺陷病毒(I型)HIV_RNA核酸定量检测SOP.doc

. . word版本 人类免疫缺陷病毒（I型）核酸定量检测系统标准操作程序 1. 目的：规范超敏PCR仪器配置系统及人类免疫缺陷病毒（HIV-I RNA）的检测过程，确保检测结果的准确性和重复性。 2. 检测方法和原理 2.1 检测方法：TaqMan探针荧光定量PCR法。 2.2 检测原理：人类免疫缺陷病毒（I型）核算定量检测试剂盒（PCR-荧光法）采用核酸扩增技术，定量检测人血浆中HIV-I RNA。该方法包括三个主要步骤：（1）样品制备以分离HIV-I RNA；（2）靶RNA的逆转录形成互补DNA（cDNA）；（3）靶（cDNA）的PCR扩增以及裂解的、靶特异性的、双标记寡核苷酸探针的检测。 3. 标本要求 3.1 标本类型：血浆（EDTA抗凝）。 3.2 标本的采集与处理 3.2.1 标本采集量：采集患者静脉血6 mL（EDTA抗凝真空采血管）。 3.2.2 标本处理：标本采集后应在2小时内送至实验室，实验室收到标本后在1小时内处理标本。 3.2.2.1签收：门诊、住院以及CDC标本签收条码，并做好相关登记工作。 3.2.2.2编号：对标本进行唯一编号，内容如下：“年月日6位数字+标本号3位数字”，例如2018年1月1日收到一个HIV-RNA标本即编号为：“180101401”。 3.2.2.3离心：800-1600g,20min离心标本。 3.2.2.4标本保存：血浆在室温（25-30℃）最多存储1天；2-8℃最多存储6天；-20℃—-80℃可存储6周。将待检血浆以2管每管1200 uL量存储于2.0mL戴螺旋盖的无菌聚丙烯管，在管壁编写如3.2.2.2的编号。未检标本放置于专用样本盒中，冻存于-80 ℃冰箱。已检血浆置-80oC冰箱保存2个月，到期后按科室有关程序作废弃标本处理。 4.仪器和试剂 4.2 试剂：（配套封闭试剂） 4.2.1 试剂盒（包含核酸提取试剂、质控品及阳性定量参考品组分、PCR 检测试剂组分）保存于2-8℃环境下，有效期22个月。 4.2.3试剂开瓶后，在室温条件下放置时间不应超过72小时；2-8℃条件下不超过30天。 4.2.4 主要组成成份： 组份名称 规格 数量 质控品 阴性质控品 1000μL/管 1 临界阳性质控品 1000μL/管 1 强阳性质控品 1000μL/管 1 HIV2CS1 48测试 1 HIV2CS2 48测试 1 HIV2CS3 48测试 1 HIV2CS4 48测试 1 5.标准操作 5.1 COBAS AmpliPrep_COBAS TaqMan 48 的配置如下： 配置 实验所需的架子和耗材 相应位置 COBAS AmpliPrep_ COBASTaqMan 48 a. K-tubes放在样本架上 b. 带有K-tips 的K-tip 架 c 将带有样本或质控的S-tubes 放在样本架上 d. 带有SPUs 的SPU-架 e. CS1放在一个试剂架 f. CS2, CS3, CS4放在一个试剂架 g. 将空的K-carrier 放在 K-carrier 架上 样本核酸提取完成后： K-carrier上的K-tubes 手工转移 F-H M-P F-H J-L A B-E M-P (M-P) 6.2. COBAS AmpliPrep_COBAS TaqMan 48上使用试剂及耗材的保存及注意事项： 1). 所有试剂（HIV-I test试剂）2-8℃保存，即拿即用； 2). 试剂启用后，可保存28 days (2-8℃)； 3). 试剂启用后，在Cobas Ampliprep上累计使用时间最多64 hrs； 4). CTM(-)阴性质控、L(+)弱阳性质控、 H(+)强阳性质控，使用后的废弃； 5). 洗液2-30℃保存，打开后可使用28 days； 6). 耗材（S-tube/样本条码/K-tip/K-tube/SPU）常温保存。 6.3. COBAS AmpliPrep_COBAS TaqMan 48上使用样本的保存及注意事项： 1). 需要的样本为血浆； 2). 血样在2～25 ℃下运输，24hrs内 (HIV RNA)收集出血浆(室温800-1600g离心 20分钟)； 3). HIV RNA检测：血浆可在室温下(25-30℃)保存最多1天，在2～8℃最多保存6天，或者-20~-80℃下长期保存，至少6周； 4). 血浆建议倒取1100-1200 μL进行保存； 5). 血浆冷冻时，最多冻融5次不损失HIV RNA。 6.4. COBAS AmpliPrep_COBAS TaqMan 48 HBV DNA定量检测操作流程： A 仪