新药药理毒理研究、分类及申报要求.ppt

遗 传 毒 性 试 验 五、遗传毒性研究 细胞染色体畸变试验 细菌回复突变试验 （Ames试验） 啮齿类动物骨髓多染 红细胞微核试验 目的观察受试物对哺乳动物是否有致基因突变作用 检测药物在动物体内对骨髓细胞染色体的损伤情况 检测药物体外有无对细胞染色体DNA产生损伤而导致诱变作用 检测药物体外有无诱导基因突变的作用 遗传毒性试验 Ames 试 验 所用菌株 TA97、TA98、TA100、TA102、TA1535 菌株鉴定 通过组氨酸需求试验、结晶紫敏感试验、紫外线敏感试验、氨苄青霉素抗性试验、四环素抗性试验、自发回变鉴定等试验进行菌株鉴定 S9制备、鉴定 选用大鼠制备肝微粒体酶（S9），鉴定其活性 试验条件、分组 在±S9条件下进行，均分为5个剂量组，每组3个平皿，同时设立阴性、阳性对照 频率 试验需重复一次 统计指标 计数每皿回变菌落数 细 胞 染 色 体 畸 变 试 验 所用细胞 CHL/CHO细胞 细胞毒性试验 染毒24h，确定IC50 试验条件、分组 在±S9条件下进行，均分为3个剂量组：+S9时，染毒6h；-S9时，染毒6h和24h，同时设立阴性、阳性对照 频率 试验需重复一次 统计指标 阅片，计数每组的染色体畸变细胞数目及结构的变化 小 鼠 骨 髓 微 核 试 验 所用动物 SPF小鼠 试验分组 50只，分为3个剂量组，每组10只，同时设立阴性、阳性对照 给药周期及频率 每天给药1次，连续给药2天，给药方式同临床 统计指标 阅片，计算嗜多染红细胞的微核发生率，同时计算嗜多染红细胞/正染红细胞的比值 六、制剂安全性试验 制剂安全性试验 溶血试验 试验体系 2%新西兰兔红细胞悬液 试验方法 选择新西兰兔红细胞作为试验系统进行体外试管法溶血性试验。供试品溶液浓度选择为临床用药浓度；同时设阴性对照和阳性对照。 取洁净试管14支，进行编号，1～5号管为供试品管，6号管为阴性对照管，7号管为阳性对照管。每个编号做2管。依次加入2%红细胞混悬液、0.9%氯化钠注射液或灭菌注射用水、供试品溶液。将各管轻轻摇匀，立即置恒温水浴锅中37±0.5℃保温3小时。分别于温育后15min、30min、45min、1h、2h、3h各观察一次各管的有无溶血情况；3h观察结束观察各管有无凝聚现象。 血管刺激性试验 动物及分组 新西兰兔5只，采用自体左右侧对照 给药方式 耳缘静脉给药，采用临床用药浓度，临床用药速度 给药频率 每天给药1次，连续给药7天 观察指标 每天观察给药部位和整体动物，末次药后48h取耳缘静脉进行病理组织学检查 肌肉刺激性试验 动物及分组 新西兰兔6只，采用自体左右侧对照 给药方式 耳缘静脉给药，采用临床用药浓度，临床用药速度 给药频率 每天给药1次，连续给药7天 观察指标 每天观察给药部位和整体动物，末次药后48h取耳缘静脉进行病理组织学检查 六、制剂安全性试验 制剂安全性试验 溶血试验 试验体系 2%新西兰兔红细胞悬液 试验方法 选择新西兰兔红细胞作为试验系统进行体外试管法溶血性试验。供试品溶液浓度选择为临床用药浓度；同时设阴性对照和阳性对照。 取洁净试管14支，进行编号，1～5号管为供试品管，6号管为阴性对照管，7号管为阳性对照管。每个编号做2管。依次加入2%红细胞混悬液、0.9%氯化钠注射液或灭菌注射用水、供试品溶液。将各管轻轻摇匀，立即置恒温水浴锅中37±0.5℃保温3小时。分别于温育后15min、30min、45min、1h、2h、3h各观察一次各管的有无溶血情况；3h观察结束观察各管有无凝聚现象。 血管刺激性试验 动物及分组 新西兰兔5只，采用自体左右侧对照 给药方式 耳缘静脉给药，采用临床用药浓度，临床用药速度 给药频率 每天给药1次，连续给药7天 观察指标 每天观察给药部位和整体动物，末次药后48h-96h取耳缘静脉进行病理组织学检查 肌肉刺激性试验 动物及分组 新西兰兔6只，采用自体左右侧对照 给药方式 股四头肌给药，采用临床用药浓度，1ml/只 给药频率 每天给药1次，连续给药7天 观察指标 每天观察给药部位和整体动物，末次药后48h取注射部位肌肉进行病理组织学检查 六、制剂安全性试验 主动全身过敏 动物及分组 SPF级豚鼠24只，分为高、低剂量组和阴性、阳性对照组，每组6只豚鼠 给药方式 致敏为腹腔注射，激发为静脉注射 给药频率 隔天一次致敏，共致敏三次，末次致敏后10d激发一次 观察指标 每天观察动物的反应，激发后观察动物的过敏反应。 被动皮肤过敏方法 取检疫合格的16只大鼠用于致敏取血清，按体重随机分为4组，分别为供试品高、低剂量组、阴性对照组和阳性对照组。隔日皮下注射1次致敏，共致敏3次；末次致敏后10d，取血，离心得血清。 另取大鼠24只，按体重随机分为4组，分别为供试品高、低剂