环境工程微生物学实验讲义.doc

时间就是金钱，效率就是生命！ PAGE 唯有惜时才能成功，唯有努力方可成就！ 时间就是金钱，效率就是生命！ 唯有惜时才能成功，唯有努力方可成就！ 《环境工程微生物学实验》讲义 适用专业：环境工程本科 鲍立宁 编 安徽建筑工业学院环境与能源工程学院 2012年6月 前 言 《环境工程微生物学实验》是环境工程专业的必修课。本课程是培养学生基本技能、训练实践技能的一个重要教学环节，通过实验使学生对环境工程中的微生物学原理有一个深入的认识，从而更深刻地理解和掌握专业基本理论和基本知识，并且为日后深入研究污水监测、处理技术提供一种实践技能。 通过本课程学习使学生掌握微生物学实验的基本原理、基本知识和基本实验技能；掌握显微镜的使用、保养，饮用水的卫生细菌学检查，微生物的基本形态认识及微生物的培养、分离、染色、计数等基本技能，培养学生独立操作能力；树立理论联系实际的基本思想，养成良好的动手能力，增强创新能力。 本课程共设十三个实验，其中显微镜的使用及放线菌、真菌、藻类等微生物形态的观察活性、污泥中原生及微型后生动物的观察和数量的测定、培养基的制备及灭菌、细菌淀粉酶和过氧化氢酶的定性测定、大肠杆菌生长曲线的测定为验证性试验；空气中微生物的检测、水中细菌菌落总数（CFU）的测定、水源水中粪便污染指示菌的检测—多管发酵法为综合性实验；环境中特殊微生物的分离、筛选及鉴定为研究性试验。 目 录 TOC \o 1-3 \h \z \u 实验一 显微镜的使用及微生物形态的观察 1 实验二 活性污泥中微型动物的计数 4 实验三 细菌、霉菌、酵母菌、放线菌形态的观察 6 实验四 用比浊法测定大肠杆菌的生长曲线 6 实验五 培养基的制备及灭菌 7 实验六 微生物纯种分离、培养及接种技术 9 实验七 微生物的染色 12 实验八 纯培养菌种的菌体、菌落形态观察 13 实验九 细菌淀粉酶和过氧化氢酶的定性测定 14 实验十 水中细菌总数的检测 15 实验十一 水中大肠菌群的检测 17 实验十二 空气中微生物的计数 20 实验十三 秸秆降解菌的分离纯化及鉴定 22 实验十四 好氧反硝化菌的分离纯化及鉴定 23 实验十五 自养反硝化菌的分离纯化及鉴定 24 时间就是金钱，效率就是生命！ 唯有惜时才能成功，唯有努力方可成就！ 时间就是金钱，效率就是生命！ 唯有惜时才能成功，唯有努力方可成就！ 实验一 显微镜的使用及微生物形态的观察 实验学时：1学时 实验类型：验证 实验要求：必修 一、实验目的 1．学习普通光学显微镜的使用方法（本实验学习低倍镜和高倍镜的使用）。 2．结合生物滤池生物膜及曝气池活性污泥的观察，认识原生动物、菌胶团等微生物的形态，并学习测量微生物大小的方法。 二、实验器材 1．生物滤池滤料、活性污泥法曝气池混合液。 2．显微镜、目测微尺、物测微尺、载玻片、盖玻片等。 三、实验步骤 (一)显微镜的结构和各部分的作用 图8-1所示，是微生物检验常用的显微镜，其构造分机械和光学两部分。 机械部分主要包括： 1．镜筒 镜筒长度一般是160mm。它的上端装有接目镜，下端有回转板。回转板上一般装有3个接物镜。 2．载物台 载物台是放置标本的平台，中央有一圆孔。使下面的光线可以通过。两旁有弹簧夹，用以固定标本或载玻片。有的载物台上装有自动推物器。 3．调节器 镜筒内旁有两个螺旋，大的叫粗调节器，小的叫细调节器，用以升降镜筒。调节接物镜与所需观察的物体之间的距离。 光学部分主要包括： 1．接目镜 一般使用的显微镜具有2～3个接目镜，其上常刻有“5×”、“l0×”或“15×”等数字及符号，意即使用时可放大5倍、l0倍或15倍。观察微生物时常用放大l0倍或15倍的接目镜。 2．接物镜 接物镜装在回转板上，可分低倍镜、高倍镜和油镜3种，其相应的放大倍数常是10、40、l00。通常显微镜的放大倍数等于接物镜与接目镜放大倍数的乘积。例如，用放大40倍的接物镜(高倍镜)与放大10倍的接目镜时所得的物象的放大倍数为40×10＝400，如果用放大15倍的接目镜则放大倍数为40×15＝600。接目镜装在镜筒上端，在使用过程中并不经常变动，所以通常所谓的低倍镜、高倍镜或油镜的观察主要是指使用不同的接物镜而言的。 油镜的放大倍数最大(100倍)。放大倍数这样大的镜头，焦距就很短，直径就很小，所以自标本玻片透过的光线，因介质密度(从玻片至空气，再进入油镜)不同，有些光线因折射或全反射，就不能进入境头，致使射入的光线较少，物象显现不清。所以为了不使通过的光线有所损失，须在油镜与玻片中间加入和玻璃折射率（n=1.52）相仿的镜油(香