第七章紫外-可见分光光度法.PPT

第六节 紫外-可见吸收光谱在有机化合物结构分析中的应用简介 一、选择题 （一）单项选择题 1．紫外-可见光的波长范围是： A. 200~400nm B．400~760nm C．200~760nm D．360~800nm 2．下列叙述错误的是： A．光的能量与其波长成反比 B．有色溶液越浓，对光的吸收也越强烈 C．物质对光的吸收有选择性 D．光的能量与其频率成反比 【目标检测】 第三节 紫外-可见分光光度计 三、紫外-可见分光光度计的类型 2.紫外-可见分光光度计 （1）单波长分光光度计 单光束分光光度计 双光束分光光度计 第三节 紫外-可见分光光度计 课堂活动 1.试述紫外-可见分光光度计的主要部件及其作用？ 2.紫外-可见分光光度计有哪些类型？ 第三节 紫外-可见分光光度计 第三节 紫外-可见分光光度计 点滴积累 紫外-可见分光光度计的基本结构相同，都由光源、单色器、吸收池、检测器、讯号处理与显示器等主要部件构成，但不同型号仪器的外形差别很大，质量和价格相差悬殊，操作方法迥异，使用之前应仔细阅读仪器使用说明书。 第四节 分析条件的选择 一、仪器测量条件的选择 1.应选择最大吸收波长作为入射光。 2.应控制吸光度读数范围： 吸光度在0.2~0.7之间； 透光率在20%~65%之间。 第四节 分析条件的选择 二、显色反应条件的选择 1.对显色剂及显色反应的要求 2.控制合适的显色反应条件 三、参比溶液的选择 1.溶剂参比溶液 2.试样参比溶液 3.试剂参比溶液 4.平行操作参比溶液 第四节 分析条件的选择 课堂活动 测定试样时，吸光度的读数应控制在0.2～0.7范围内。若吸光度读数不在此范围，可采用哪些方法进行调整? 第四节 分析条件的选择 点滴积累 1．选择吸光性物质的最大吸收波长作为测定波长。 2．使用紫外-可见分光光度计时，读数范围应控制在吸光度为0.2～0.7，透光率为65% ～ 20%之间。 3．待测物质在紫外-可见光区无吸收时，应加显色剂。显色剂不得有干扰，反应必须完全。 4．一般用溶剂作参比溶液。必要时采用试样参比溶液、试剂参比溶液或平行操作参比溶液。 第五节 定性定量方法 一、定性分析方法 定性的基本依据：比较光谱的一致性。 未知物和标准品的吸收光谱曲线，对比二者是否一致。 比较吸收光谱的特征数据及比值的一致性。 二、杂质检查： 将药品光谱与药品标准光谱相对照，利用杂质的特征吸收，可以检测出微量杂质及其含量。 案例分析 贝诺酯的定性鉴别 中国药典(2010年版)规定：贝诺酯加无水乙醇制成每1ml约含7.5μg的溶液，在240nm处有最大吸收，相应的百分吸光系数( )应为730～760。 维生素B12也有三个吸收峰，分别在278nm、361nm、550nm波长处，它们的吸光度比值应为：A361nm/A278nm在1.70～1.88之间，A361nm/A550nm在3.15～3.45之间。 第五节 定性定量方法 案例分析 葡萄糖注射液是临床上常用的药品之一。制备时需要高温灭菌，葡萄糖会转化为5-羟甲基糠醛而引入杂质。《中国药典》（2010年版）规定葡萄糖注射液在284nm波长处的吸收度不得过0.32，以此控制其杂质5-羟甲基糠醛的量。 在284nm波长处，葡萄糖无吸收，而杂质5-羟甲基糠醛在此波长处有最大吸收，可以通过控制供试品溶液在此波长处的吸收度来控制杂质的含量。 第五节 定性定量方法 第五节 定性定量方法 三、定量分析方法 定量分析的依据: A＝K ·c ·L（光的吸收定律） （一）单组分溶液的定量方法 1. 标准曲线法： 是紫外-可见分光光度法中最经典的定量方法。 第五节 定性定量方法 标准曲线法的方法和步骤如下: （1）配制一系列不同浓度的标准溶液，选择合适的参比溶液，在相同条件下，以待测组分的最大吸收波长 作为入射光，分别测定各标准溶液对应的吸光度。 （2）以浓度c为横坐标、吸光度A为纵坐标描绘标准曲线。 第五节 定性定量方法 （3）按照相同的实验条件和操作程序，用待测溶液配制未知试样溶液并测定其吸光度A样，在标准曲线上找到与之对应的未知试样溶液的浓度c样 。 如右图。 第五节 定性定量方法 2.标准对比法: 在相同的条件下，配制浓度为cs的标准溶液和浓度为cx的试样溶液，在最大吸收波长处，分别测定二者的吸光度值为As、Ax ，依据朗伯-比尔定律得： As=csL Ax=cxL 则: 第五节 定性定量方法 3.吸光系数法: 吸光系数法直接利