精子形态分析及染色.PPT

8-1 精子常规分析与形态学染色 河南省人口和计划生育科学技术研究院 孕前优生健康检查临床检验操作技术培训 精液常规检验 采集：采集前必须禁欲2~7天，采集后立即送检，存放时间不要超过1小时，运送时温度与体温相近。 外观和气味：正常呈灰白或乳白色，厚稠胶冻状，液化后呈乳白色半透明状。精子数量少，精液透明且稀薄；精液中有较多红细胞，可呈红褐色；黄色精液见于精液中有较多脓细胞，或服用药物。 量：正常=2mL，下限是1.5mL，小于1mL，视为异常，见于精囊腺和前列腺病变。 液化：室温正常5~10分钟液化，20~40分钟可完全液化，1小时仍不液化应视为异常，一般与缺乏蛋白水解酶有关。 粘稠度：精液粘稠度异常可影响精子的活力和穿透力。用吸管吸入精液，滴落精液观察，粘稠度增加时，精液悬滴可形成2cm的拉丝。 PH值：正常精液PH呈弱碱性，=7.2（滴PH试纸30秒）。精液的PH过低，可影响其对阴道酸性环境的调节作用，影响精子活力。亦可能与精囊发育不良有关。 精子浓度的参考值下限为：15X106/mL 精子总数的参考值下限为：39X106/mL 精子密度过低或无精见于： 1、睾丸生精功能异常 2、输精管、射精管、精囊存在缺陷 3、精索静脉曲张 4、生殖道炎症 5、流行性腮腺炎并发睾丸炎 6、绝育手术后 7、放射性照射，有害化学物质污染及药物作用等。 精子存活率：活精子数量在精子总数量中所占的比例。 伊红-苯胺黑染色：50uL精液与等体积的染液混匀，等待30秒；采用拉薄技术制成涂片，空气中干燥，高倍镜观察，活精子头部成白色或淡粉红色，死精子头部呈红色或暗粉红色。 正常参考值： （参考下限是58%） =70%（射精后1h） = 40~50%（射精后3h） = 20~30%（射精后6h） 精子活力：正常精子的活动力，精子向前运动的能力。计数200个精子的分级情况。 WHO把精子的活动力分为4级。(5版分3级) d：不动 PR：前向运动 c：非前向运动 NP：非前向运动 b：慢速或呆滞的前向运动 IM：不活动 a：快速向前运动 正常为：a级25%或a+b50% （5版）的参考值下限是 前向运动精子（PR）：32% 精子总活力（PR+NP）：40% 临床意义：活力下降、弱精子症：见于液化不良、粘稠度增高、精液凝集，精子结构异常，内分泌功能异常，精索静脉曲张等。 精子细胞形态学检查 1、正常精子形态：正常在精液中占15% (5版)参考下限为：4% 2、畸形精子：头部形状、大小异常；体部异常；尾部异常。 临床意义：精子形态异常与生殖系统的感染、外伤、雄激素变化、化学药物中毒及遗传因素有关。 3、生精细胞、精原、初级精母、次级精母、精子细胞。 正常时少量，当曲精管的生精能力受到损害时，精液中可出现较多的病理性幼稚细胞。 4、其他成分 红细胞（极少）：血精症、睾丸瘤、前列腺瘤 白细胞（=1X106/mL）：生殖道炎症 癌细胞：输精管恶性肿瘤 人精子形态模式图 头部：轮廓规则，顶体 清楚，顶体帽至少覆盖 头部表面的1/3。 中段：细长，不超过头 宽1/3，轮廓直而规则。 尾部：细长，弯曲不卷 曲。 正常形态精子的概念 把“具备潜在受精能力精子”（亚群）的外观作为形态正常的标准。 人为设定临界标准，规定“临界形态精子都是异常”。 操作前准备 一侧有磨砂载玻片 盖玻片（24mmX50mm） 10uL移液器及吸头 纱布或纸巾 记号笔 巴氏染液或Diff染液 精液涂片的制备 每份新鲜的精液标本应制备两张或更多的涂片，以防染色发生问题或载玻片破碎。 每次取样前要充分混匀精液。 对于未稀释的精液，采用拉薄技术；对于已洗涤的精液，采用移液管法。 涂片前准备： 1.用纱布或纸巾擦干净载玻片的两面 2.用记号笔在载玻片的磨砂处标记上编号、日期。 涂片的方法 充分混匀待涂片精液标本，根据精子浓度，用移液器去5~10uL的精液滴在载玻片的一端，立即用第二张载玻片的非磨砂端以45°角（角度越小，涂片越薄）沿第一张载玻片的表面移动并接触精液滴，然后沿载玻片的长轴缓慢拖回拉片（约一秒；速度越快，涂片越厚），制成一张涂片。 对于高粘稠或低密度或充满碎屑精液：稀释精浆或离心去精浆。 方法：取0.2~0.5mL精液，加10mL生理盐水，800g离心10分钟，除去大部分上清液，轻轻拍打试管，使精子团重新混悬于剩余的上清液中。 必要时可加生理盐水重复洗涤一次。 洗涤后的精子浓度在20-50X106/ml为好。 洗涤的目的是减少背景