细菌的常用生化试验.PPT

细菌的常用生化试验 细菌室 23种细菌鉴定常用生化试验 1.碳水化合物的代谢试验 　　（1）糖（醇、苷）类发酵试验（2）氧化一发酵试验（O／F试验） 　　（3）β-半乳糖苷酶试验（ONPG试验）（4）七叶苷水解试验 　　（5）甲基红试验（6）V-P试验 　　2.蛋白质和氨基酸的代谢试验 　　（1）明胶液化试验（2）吲哚（靛基质）试验（3）硫化氢试验 　　 ）尿素分解试验（5）苯丙氨酸脱氨酶试验（6）氨基酸脱羧酶试验 　　3.碳源和氮源利用试验 　　（1）枸橼酸盐利用试验（2）丙二酸盐利用试验 　　4.各种酶类试验 　　（1）氧化酶试验（2）过氧化氢酶试验（触酶试验）（3）硝酸盐还原试验 　　（4）脂酶试验（5）卵磷脂酶试验（6）DNA酶试验（7）凝固酶试验 　　（8）CAMP试验 一、碳水化合物的代谢试验 原理 由于细菌各自具有不同的酶系统，对糖的分解能力不同，有的能分解某些糖产生酸和气体，有的虽能分解糖产生酸，但不产生气体，有的则不分解糖。据此可对分解产物进行检测从而鉴别细菌。 具体试验有：①糖类发酵试验；②葡萄糖代谢类型鉴别试验；③七叶苷水解试验；④淀粉水解试验；⑤甲基红试验；⑥V-P试验；⑦β-半乳糖苷酶试验（ONPG试验）。 1.糖（醇、苷）类发酵试验 原理：由于各种细菌含有发酵不同糖（醇、苷）类的酶，故分解糖类的能力各不相同，细菌分解糖类后的终末产物亦不一致，有的产酸、产气，有的仅产酸，故可利用此特点以鉴别细菌。 方法：将分离的纯种细菌，以无菌操作接种到糖（醇、苷）类发酵培养基中，置培养箱中培养数小时至两周后，观察结果。 结果：若能分解培养基中的糖（醇、苷）类产酸时，培养基中的指示剂呈酸性反应。若产气可使液体培养基中倒管内或半固体培养基内出现气泡，固体培养基内有裂隙等现象。若不分解，培养基中除有细菌生长外，无任何其他变化。 应用：是鉴定细菌最主要和最基本的 试验，特别对肠杆菌科细菌的鉴定尤 为重要。 2.氧化-发酵试验（0/F试验） 原理： 不同细菌对不同的糖分解能力及代谢产物不同，这种能力因是否有氧气的存在而异，有氧条件下称为氧化，无氧条件下称为发酵。 方法：将待检菌同时穿刺接种两支HL培养基，其中一支培养基滴加无菌的液体石蜡（或其他矿物油），高度不少于lcm。将培养基于35℃培养48h或更长。 结果： 应用：主要用于肠杆菌科细菌与非发酵菌的鉴别，前者均为发酵型，而后者通常为氧化型或产碱型。也可用于葡萄球菌与微球菌间的鉴别，前者是发酵型，后者是氧化型。 发酵型（产酸） 氧化型 产碱型 3.β-半乳糖苷酶试验（ONPG试验） 原理? 细菌分解乳糖依靠两种酶的作用，一种是β—半乳糖苷透性酶，它位于细胞膜上，可运送乳糖分子渗入细胞。另一种为β-半乳糖苷酶，亦称乳糖酶，位于细胞内，能使乳糖水解成半乳糖和葡萄糖。具有上述两种酶的细菌，能在24—48h发酵乳糖，而缺乏这两种酶的细菌，不能分解乳糖。 方法：从克氏双糖铁培养基上取菌，于0.25ml无菌生理盐水中制成菌悬液，加入一滴甲苯并充分振摇，使酶释放。将试管置37℃水浴5min，加入0.25ml ONPG试剂，水浴20min～3h观察结果。 结果：菌悬液呈现黄色为阳性反应，一般在20～30min内显色。 应用：迅速及迟缓分解乳糖的细菌ONPG 试验为阳性，而不发酵乳糖的细菌为阴性。 本实验主要用于迟缓发酵乳糖菌株 的快速鉴定。 4.七叶苷水解试验 原理 方法：将待检菌接种于七叶苷培养基中，培养后观察结果。 结果：培养基变为黑色为阳性，不变色者为阴性。 应用：主要用于D群链球菌 与其他链球菌的鉴别， 前者阳性，后者阴性。 5.甲基红试验 原理：肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖，在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸，进一步分解中，由于糖代谢的途径不同，可产生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，可使培养基PH值下降至pH4.5以下，使甲基红指示剂变红。 方法：将待检菌接种于葡萄糖蛋白胨水培养基中，培养2～4d，于培养基内加入甲基红试剂，立即观察结果。 结果：呈现红色为阳性；橘红色为弱阳性；黄色为阴性。 应用：主要用于鉴别大肠埃希菌与产气肠杆菌，前者为阳性，后者为阴性。肠杆菌科中沙门菌属、志贺菌属、枸橼酸杆菌属、变形杆菌属等为阳性，而肠杆菌属、哈夫尼亚菌属则为阴性。 6.V-P试验 原理 方法：将待检菌接种于葡萄糖蛋白胨水培养基中，于35℃培养48h后加入甲液（6%α-萘酚酒精溶液）和乙液（40%KOH溶液），振摇。 结果：在数分钟内出现红色为阳性；如无红色出现且于35℃4h后仍如故者即为阴性。 应用：本试验常与甲基红试验 一起使用，因为前者阳性的细 菌，后者通常为阴性。 二、蛋白质和氨基酸的代谢试验 原理：不同种类的细菌分解蛋白