结核分枝杆菌传统药敏试验方法.PPT

* * * * Objectives of this guideline is to assist TB control program managers and physicians in proper use of second-line drug susceptibility test data and to permit determination of true scope of second-line drug resistance for surveillance. The guideline also aim to recommend the laboratory to use standardized second-line DST methodologies and protocols; appropriate classes of drugs for DST; the scope of internal QC measures; and a framework for the evaluation of new drugs. * Objectives of this guideline is to assist TB control program managers and physicians in proper use of second-line drug susceptibility test data and to permit determination of true scope of second-line drug resistance for surveillance. The guideline also aim to recommend the laboratory to use standardized second-line DST methodologies and protocols; appropriate classes of drugs for DST; the scope of internal QC measures; and a framework for the evaluation of new drugs. 传统的药敏实验 S J Kim, The Union 药敏试验的目的 耐药监测 - 评估治疗方案 - 选择有效的标准方案 病例管理 - 诊断耐药结核病(耐多药/广泛耐药结核病） - 为个体病例(耐多药/广泛耐药结核病）选择有效的方案 问题 ? 可靠性: 技术重复性/ 临床反应预 测 ? 周转时间 ? 操作可行性及可持续性 ? 成本 基于标本的药敏检测系统 直接法 直接涂片法（涂片阳性） 优点: 结果快; 更好的反映耐药情况 缺点: 大多数药敏试验不理想;接种量不容易标化/ 可行性较差 -间接法 对结核分枝杆菌进行培养后进行药敏试验 优点: 更好的控制接种量 缺点: 结果延迟 以传统的生长检测为基础的药敏试验方法 以传统生长检测为基础的方法 WHO（1963）的标准方法 绝对浓度法- Meissner - 标化接种量; 药物浓度梯度 抗性比率法- Mitchison - 克服培养基中药物浓度变化的缺点 比例法- Canetti / Grosset - 临界浓度比例,更好的控制接种量 [G Canetti/ J Grosset, France; S Froman, USA; P Hauduroy, Switzerland; M Langerova/ L Sula, Czechoslovakia; HT Mahler (WHO); G Meissner, Germany; DA Mitchison, England] 以快速培养生长检测为基础的药敏试验方法 快培生长系统 观察显微镜下的微小菌落: - 玻片培养；显微镜观察的药敏试验（MODS） 代谢情况检测: - CO2 产生量(放射BACTEC 460; 色素变化 MB/Bact 3D) - O2 消耗 (荧光产生 MGIT960) - TREK系统 (ESP 培养系列 II) - 微盘： 阿莫拉蓝试验 (指示管)/TEMA - ATP 产生, 生物荧光试验 噬菌体检测: FASTPlaque; Bonx box (LRP) 以检测基因突变为基础的快速药敏试验系统 扩增目标区的DNA测序 聚合酶链反应-单链构象多态性分析技术; - 探针杂交：反向探针线性杂交方法； Hain 分枝杆菌药物抗性plus 分子灯塔/信标： GeneXpert系统是