辣椒疫霉菌RxLR效应分子诱导细胞死亡活性分析与互作靶标鉴定.pdfVIP

辣椒疫霉菌RxLR效应分子诱导细胞死亡活性分析及互作靶标鉴定 2．3．1农杆菌GV3101感受态细胞的制备………………………………………27 2．3．2农杆菌GV3101感受态细胞的转化方法………………………………．．27 2．4目的基因在烟草中的瞬时表达…………………………………………………．28 2．5结果与分析………………………………………………………………………．28 2．5．1效应分子RxLR的引物设计………………………………………………28 2．5．2效应分子载体构建………………………………………………………。29 2．5．3效应分子RxLR242诱导细胞死亡………………………………………．30 1 2．6讨论…………………………………………………………………………………………………………．3 第三章：效应因子与拟南芥抗病相关蛋白互作测试…………………………………一33 3．1试验材料…………………………………………………………………………．．34 3．1．1试验材料……………………………………………………………………．34 3．1．2试验试剂……………………………………………………………………34 3．1．2试验器材…………………………………………………………………。35 3．2酵母感受态细胞制备及转化方法………………………………………………．35 3．3小规模的酵母mating……………………………………………………………．35 3．4结果与分析………………………………………………………………………．36 3．4．1拟南芥抗病相关基因EDSl的克隆………………………………………36 3．4．2 EDSl与RxLRl03、RxLRl 1能直接互作………………………………．38 3．4．3 RxLR237具有自激活活性………………………………………………．．40 3．4．4 EDSl与其他RxLR不能直接互作………………………………………40 3．5讨论…………………………………………………………………………………………………………．43 全文总结及创新点………．：………………………………………………………………45 参考文献…………………………………………………………………………………．．47 附录(基因序列信息)………………………………………………………………………53 附录(培养基配方)…………………………………………………………………………59 致谢…………………………………………………………………………………………61 万方数据 摘要 辣椒疫霉菌RxLR效应分子诱导细胞死亡活性分析及互 作靶标鉴定 摘要 疫霉(Phytophthora capsi)隶属卵菌门，在进化上与真菌相差甚远，和藻类同 属于茸鞭生物界，尽管和其他真菌一样呈丝状生长，但是其致病机理与其他真菌差异显 著。疫霉菌．-fl-以分泌大量的效应因子，干扰植物的防卫反应，促进病原茵的侵染和 定殖。根据其在寄主植物中的定位不同，效应因子分为胞外和胞内效应因子两大类。 可分为：信号肽、氨基端RxLR．dEER转运结构域和羧基端功能结构域三部分。推测 RxLR-dEER类蛋白能够进入植物细胞内，有毒性功能。尽管目前已经表明效应因子在 含有对应抗病蛋白的植物上引起过敏性细胞死亡，但是我们对于这些RxLR效应蛋白 在感病植物上的作用及其机制还不清楚，其植物上的分子靶标也有待鉴定。 本研究利用辣椒疫霉菌作为卵菌的模式，克隆了15个在侵染阶段表达量较高的 对辣椒疫霉RxLR效应分子的细胞死亡诱