培养基、缓冲液、稀釋液、淋洗液和试剂的验证.ppt

应在正式使用前即应完成对培养基、缓冲液、稀释剂、冲洗液和试剂的质量检查。如果在进行灵敏度试验的同时，也使用该培养基进行样品检查，那么，一旦培养基的无菌性或灵敏度不符合规定，则检验结果应无效。无论这些质量控制检查试验何时完成，实验室都必须在相关产品放行之前或检验报告发出之前，对所用培养基、缓冲液、稀释剂、冲洗液和试剂的无菌性及灵敏度试验资料的完整性和合格结论予以确认。 灵敏度（促生长性）检查试验用的菌悬液，要采用《中国药典》规定的在5代之内的标准菌种制得，也可向具备适当资质的供应商购买。目前市场上有此类商用产品，检查用菌种的小瓶内的每片薄膜含有10～100CFU。产品使用简单方便，但需严格遵守供应商的使用要求。尽管所购试验菌种均附有质量证书，但正式使用前，仍必须用倾注平皿法或铺表面法等标准检测方法对菌悬液的微生物数量进行复核确认。 返回 五、染色液与各种生化反应试液的验证 染色鉴定在微生物限度检查中十分重要，特别是对G染色尤其重要。除操作者的操作技术外，染色液配制后的质量与各种生化反应试液的质量是否符合规定就显得很重要。目前国内广东省环凯微生物科技有限公司已有商品生产供应（表5－7），可以购买使用，但应验证确认。方法同新配制好的染色液一样，必须选用适当的标准菌株作阳性及阴性对照来验证染色液的性能，如G染色最好选用枯草杆菌和藤黄八叠球菌，亦可用葡萄球菌和大肠杆菌作为对照。对经验不足者，每次染色时均应作对照染色。验证好染色液后贴好标签，置于阴暗处保存。根据笔者过去经验，其有效期可为数月～3年，若分装于密闭性容器（如干燥器内等），并保存在冷藏条件下，其有效期更长。但应根据贮存条件和确认试验结果而定。 表5－7：微生物检测配套试剂 返回 六、缓冲液、稀释液、冲洗液 返回 七、文件管理、标签 所有的微生物实验记录中应包含试验用培养基、稀釋液、淋洗液、缓冲液和试剂的信息，此信息应可追溯到其原始配制记录和质量检查记录。实验室内有关培养基、稀釋液、淋洗液、缓冲液和试剂的制备和质量控制记录（包括名称）应与中国药典要求相一致。 文件记录中还应提供如下信息，各组分的生产厂家或供应商的名称、化学名称、批号、纯度（必要时）配制用水的类型和来源（必要时）有效期以及使用数量；培养基配制后的包装方式及数量；灭菌程序参数及记录；质量检查结果等。表5－7为培养基配制记录的一种格式，实验室可根据实际需要做相应变更。 表5－7: 培养基配制记录表培养基名称： 成份 生产厂家 规格 批号 称量 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 加蒸馏水 mL，调pH值至 ，分装 ， 灭菌 ℃ min，测pH值为 。 已配制好的培养基、稀釋液、淋洗液、缓冲液、试剂，须分别贴以相应标签，标明名称、批号、配制人、配制时间和有效期等。所用标签及标签上的文字应能经受住水或消毒剂浸湿而不脱落或模糊不清。要保证每一内容物的容器均贴有正确标签，即使是配制过程中所用的容器也不例外，这才能达到GMP的审计、检查要求。 返回 八、有效期的确认 对已配制的培养基、稀釋液、淋洗液、缓冲液和试剂的有效期及储存条件，应予确认。应制定有1个正式方案，并经微生物检测室和质量保证部门主管人员批准，然后进行效期确认试验。针对每种类型（或代表性类型）的培养基、稀釋液、淋洗液、缓冲液、试剂，至少选择3个批次进行验证性试验，第一次检测应在配制结束后立即进行。此后，可将每次配制批次中剩余的培养基置于规定条件下储存，并以较高的检测频率（如数天、周、月）对其进行再测试，以确保适宜的有效期。如果是选用代表性的培养基进行此类确认试验时，则应挑选配方相似且保存条件最为苛刻者作为试验的研究对象。考察的每个项目均要以文档形式保存于验证方案中。 对培养基的有效期进行初始性确认时，需进行pH、外观、无菌性和灵敏度的检查。对于缓冲液需要进行pH、外观检查，必要时检查无菌性。而对于稀釋液、淋洗液、试剂，则应检查其外观、效价或性能、以及必要时检查其无菌性。在确认抗生素效价分析用培养基的储存条件和有效期时，要采用抗生素分析法，将所得的三条标准曲线与当作样品的中剂量标准品进行对比分析，试验时，分析人员需要评价抑菌圈的大小、清晰度、曲线斜率及检测中剂量标准品的百分回收率的变异性。 有效期一经确认后，应将其列入相应规程，并在相应的培养基容器标签上标明。 如果实验室配制的培养基、稀釋液、淋洗液、和缓冲液置于密闭性容器内储存，其有效期可为1～2个月，若培养基分装于非密闭性容器（如培养皿、试管等），保存在冷藏条件下，其有效期为7～14 d。每种培养