邻位连接技术PLA.pptx

邻位连接技术（PLA）;PLA技术简介;PLA技术简介;PLA技术简介;PLA原理 原理：该技术采用核酸适体（aptamer）或单/多克隆抗体-寡聚核苷酸复合物作为邻位连接探针（proximity probes）。当一对邻位探针同时识别同一个目标蛋白分子（一个蛋白复合体中的两个蛋白）时，它们将在空间位置上相互临近，通过连接反应形成一段可扩增的DNA标签序列，该标签序列能够反映待测蛋白的表达及互作情况。 ;一对邻位探针的识别因子 (抗体 )分 别结合到 蛋白质上, 探针上的 DNA 序列发生邻位连接, 通过定量 PCR进行放大检测, 即可进行目的蛋白的定量分析。;PLA分类： 根据邻位探针的类型可分为适体 PLA 和抗体PLA。 ;PLA分类： 单相PLA，固相PLA，原位PLA，3PLA，多元PLA。 ;原位PLA;固相PLA;PLA技术应用;PLA技术检测蛋白的核心—一对邻位探针;目前 PLA 探针的制备正逐步走向商业化，其中OLINK 生物科技公司利用原位PLA技术生产出了Duolink试剂盒。;Duolink检测原理;Duolink检测流程;Duolink技术应用领域 蛋白质互作及其修饰的检测 细胞蛋白定位分析 数字化定量 ;1. 检测稳定、瞬时和微弱的蛋白互作（可视化）;Duolink的应用举例;Duolink的应用举例;a.in situ PLA was used to screen a library of kinase inhibitors for compounds that inhibited phosphorylation of the PDGFR in stimulated human primary fibroblasts.b.validate the hits from the library screen. C. the effect of imatinib on PDGFR interactions with PI3-kinase in unstimulated and stimulated cells.;4.数字化定量;Duolink的关键是一抗的选择 一抗必须是来自不同种属 Duolink kit 也可构建个性探针 检测同源二聚体蛋白时 用同一种属来源的一抗研究蛋白互作时 用其他种属来源的一抗研究蛋白互作时 ;Thanks for your attention