内毒素的检测.ppt

葡萄糖 丙酮酸 大量混合酸 pH降至4.4以下 甲基红试剂 培养基变红 2.甲基红试验 乙酰甲基甲醇（中性） pH＞5.4 甲基红试剂 培养基橘黄色 大肠杆菌 产气杆菌 [方法] 在大肠杆菌和产气杆菌培养物中滴加甲基红指示剂数滴，立即观察结果。 [结果] 红色为阳性，+ 不出现红色为阴性，- 葡萄糖 丙酮酸 乙酰甲基甲醇 二乙酰 V-P试剂 培养基变红 与蛋白胨培养基精氨酸中的胍基 反应生成红色化合物 3. V－P试验 产气杆菌 [方法] 取出试管培养物，加入等量的李氏试剂，摇匀后不加塞，静置30分钟观察结果。 [结果] 红色为阳性，+ 无红色为阴性，- 枸橼酸盐 铵盐 碳酸盐 氨 培养基pH上升 溴麝香草酚蓝 呈碱性变色 培养基变蓝 培养基 4. 枸橼酸盐利用试验 产气杆菌 [结果] 深蓝色为阳性+ 绿色为阴性- （三）硫化氢产生试验 [原理] 某些细菌能分解蛋白质中的含硫氨基酸，如半胱氨酸、甲硫氨酸，而生成硫化氢。硫化氢遇培养基中的铅盐或铁盐，形成黑色的硫化铅或硫化亚铁沉淀物。 [方法] 分别穿刺接种大肠杆菌、变形杆菌至两管醋酸铅培养基中。37℃孵育24小时后观察结果。 [结果] 沿穿刺线部位呈黑褐色， 表明有硫化氢产生，为阳性以“+”表示，不变色者为阴性，以“-”表示。 大肠杆菌：- 变形杆菌：+ 二、肠道杆菌的鉴定 实验目的： 1.熟悉病原性杆菌的一般鉴定过程； 2.进一步熟练掌握革兰染色的操作； 3.学会在选择培养基中进行菌落的观察； 4.掌握肠道杆菌在双糖铁培养基上的生长 特点。 粪 便 增菌培养（必要时） SS 培养基 菌落特征；涂片镜检（革兰染色）； 生化反应 血清学鉴定 （玻片凝集） 报告结果 肠道杆菌的鉴定程序 已完成 接种双糖铁 SS培养基上各菌的生长特点： 大肠杆菌：粉红色大菌落 痢疾杆菌：无色细小半透明菌落 伤寒杆菌：半透明小菌落，黑色沉淀 （一）观察SS培养基上细菌生长现象 冲洗 染色完成之后，在涂片区滴上香柏油使用油镜观察实验结果 （二）革兰染色（取ss培养基上的两种菌落的细菌染色） 1.细菌涂片的制备 涂片 干燥 固定 2.染色 初染（结晶紫） 媒染（碘液） 脱色 （丙酮乙醇） 复染（沙黄） 吸水纸吸干 10s 10s 10-20s 30s 冲洗 冲洗 冲洗 （三）双糖铁培养基（KIA）进行培养 方法：穿刺+斜面 接种针挑取单个菌落，沿培养基中心垂直插入至距离管底0.5cm处，原路退出。 接种环挑取单个菌落，自斜面底部向上划一直线，然后再从斜面底部向上轻轻来回作蜿蜒划线。 培养18-24小时，观察结果并分析。 注意：1. 应在菌落稀疏部位挑取单个菌落。 2. 穿刺和斜面接种原则上应为同一个菌落。 3. 不同的小组可以选择不同颜色的菌落来接种。 双糖铁培养基上各菌的生长特点 含有乳糖和葡萄糖：产酸产气 含有硫酸亚铁：如细菌分解含硫氨基酸生成 硫化氢，可形成黑色沉淀。 酚红指示剂： 酸 黄 碱 红 酚红的变色范围：6.8-8.0 黄-红 1.大肠杆菌发酵乳糖和葡萄糖产酸产气（糖发酵试验），使斜面及底层均呈黄色并有气泡。 2.沙门菌和志贺菌只发酵葡萄糖，不发酵乳糖，分解葡萄糖产的酸使培养基pH下降，酚红指示剂变黄，但是培养基中的葡萄糖仅有0.1%，在斜面的酸性物质被氧化成挥发性酸，且细菌氧化氨基酸物质产生的氨的中和作用，使斜面变红，而底层则为黄色。 双糖铁培养基上各菌的生长特点 双糖铁培养基上各菌的生长现象 大肠杆菌 黄色有气泡 伤寒杆菌 上红下黄中间有黑色沉淀 痢疾杆菌 上红下黄 （四）血清学试验-玻片凝集法 方法： 1.取清洁玻片一张，用记号笔划分成两部分。分别在两边滴加1滴沙门菌属多价血清。 2. 用接种环挑取SS平板上菌落（黑色菌落，粉红色大菌落）与血清混合研磨成均匀乳状。 3.轻轻摇动玻片，1min内观察结果。 伤寒血清+待测菌 伤寒血清+待测菌 结果: 凝集+ （伤寒杆菌）；无凝集-（大肠杆菌） 本次实验所做内容 肠道杆菌鉴定 （1）观察菌落特征（SS平板） （2）取可