人类辅助生殖技术(ART)基本概念.ppt

IVM中存在的问题 胚胎质量差，8-细胞阻滞发生率高 妊娠率非常低，迄今为止出生婴儿不超过50个 内膜准备不足 IVM的研究方向和临床应用前景 改进不成熟卵子的获取方法及改善成熟系统 IVM常规地应用于临床需相当长的时间 IVM的实验室操作程序 IVM皿 -1D/P2:30 未成熟 卵回收 LAG LAG LAG 1 2 3 4 培养至下 午两点半 LAG IVM 冲皿 -1D/A -1D/A -1D/A -1D/P2:30 LAG IVM IVM Medium (含FSH/HCG/ 10%HAS) 培养至第二 天下午三点 0D/P2:30 ICSI 0D/P3:00 culture ET 3D/A10:00 培养液的准备:DPBS加肝素/SSS；IVM加FSH/HCG/HAS -2D/P ICSI皿 核移植在人类生殖中的应用前景Future application of nuclear transfer in human reproduction 治疗性克隆 Therapeutic cloning 配子重建 Gametes reconstruction ? 生殖泡移植 Germinal vesicle transfer Zhang J, et al. Fertil Steril 1999;71:726-731 ? 从体细胞构建卵子Oocyte manufactured from somatic cell  Tsai MC, et al. Hum Reprod 2000;15:988-998 Therapeutic cloning治疗性克隆 Science，2000 Germinal vesicle transfer（Zhang J, et al. Fertil Steril 1999 :71:726) Germinal vesicle transfer(Zhang J, et al. Fertil Steril 1999;71:726) Manufacturing oocytes(Tsai MC, et al. Hum Reprod 2000;15:988) Manufacturing oocytes(Tsai MC, et al. Hum Reprod 2000;15:988） Manufacturing oocytes(Tsai MC, et al. Hum Reprod 2000;15:988) 存在的问题 体细胞核的重排问题 是否存在早衰现象 胚胎继续发育能力差 细胞质/原核移植技术 辅助生殖技术中的一些基本概念 ART:辅助生殖技术 IUI: 宫腔内人工受精 AID：供精人工受精 IVF: 体外受精 ICSI: 卵胞浆内单精子注射 GIFT: 配子输卵管内移植 ZIFT: 合子输卵管内移植 PESA: 附睾取精 TESA: 睾丸取精 OPU：取卵 ET: 胚胎移植 TET：冷冻胚胎移植 AH: 辅助孵化 PGD: 植入前诊断 * D3上午 → → → ↓ ← ← D4桑椹胚，已融合 囊腔开始出现 D5正在扩张囊胚 D6完全扩张囊胚 正在孵出囊胚 已孵出囊胚 D3－D5胚胎发育情况 根据病人子宫内膜等情况，选择合适的胚胎ET，35岁以及以下移植胚胎不能超过两枚，35岁以上移植胚胎不能超过三枚，多余胚胎冷冻。 UTM(约0.5ml) 双颈皿 胚胎评分 将待移植胚胎移至ET皿 将ET皿置培养箱待ET 冲刷移植管 装载胚胎 交与临床大夫ET 检查ET管是否有胚胎遗漏 D3胚胎移植(ET) 超声监测下胚胎移植 Ice Crystal Formation 冷冻保护液PROH/蔗糖 胚胎 Why? Seeding目的是通过人工植冰的方法，让细胞外水分结冰从而增加细胞外溶液渗透压，这样细胞就会进一步脱水，也就是减少了程序冷冻过程中细胞内冰晶的形成，将对细胞的伤害降低到了最低！ D3胚胎冷冻－程序化冷冻原理 1冲洗 2 10min 3 PBS+20%SSS 1.5MPROH 1.5MPROH/0.1Msucrose 胚胎 装管 程序冷冻 投入液氮 D3胚胎冷冻－程序化冷冻过程 从液氮中取出装胚胎的麦管 在空气中摇晃30秒钟 在30度水浴中摇晃30秒钟 1 5min 2 5min 3 10min 1.0MPROH 0.2Msucrose 0.5MPROH 0.2Msucrose