化妆品中维甲酸、异维甲酸的检测方法.doc

PAGE 附件2： 化妆品中维甲酸、异维甲酸的检测方法 （征求意见稿） 1 适用范围 本方法规定了采用高效液相法测定化妆品中维甲酸（CAS: 302-79-4）和异维甲酸（CAS: 4975-48-2）含量的方法。 本方法适用于膏霜、乳液、水剂等化妆品中维甲酸和异维甲酸的测定。 2 方法提要 样品经过提取后，经高效液相色谱分离，二极管阵列检测器检测，根据保留时间和紫外光谱图定性，峰面积定量，以标准曲线法计算含量。本方法对维甲酸及异维甲酸的检出限均为1ng，定量下限为3 ng；若取0.2 g样品测定，则维甲酸及异维甲酸的检出浓度均为0.0005 %，定量下限为0.0015 3 试剂和材料 除另有规定外，试剂均为分析纯，水为一级实验用水。以下操作均在避光条件下进行。 3.1 甲醇：色谱纯。 3.2 冰醋酸。 3.3 2 %冰醋酸溶液：量取冰醋酸（3.2）20mL，用980mL水溶解。 3.4 维甲酸，纯度≥98%。 3.5 异维甲酸，纯度≥98%。 3.6 标准储备液：分别准确称取维甲酸及异维甲酸10 mg（准确至0.1mg），置于100 mL棕色容量瓶中，用甲醇（3.1）溶解并稀释至刻度，摇匀，得100 μg/mL的标准储备液。 3.7 系列浓度标准工作溶液：用甲醇（3.1）将储备液配制成浓度分别为1 μg/mL、5 μg/mL、10 μg/mL、50μg/mL、100μg/mL的系列浓度标准工作溶液。 4 仪器 4.1 高效液相色谱仪：配有二极管阵列检测器。 4.2 液相色谱－三重串联四级杆质谱联用仪。 4.3分析天平：感量为0.000 4.4 高速离心机。 4.5 超声波清洗仪。 4.6 漩涡振荡器。 5 测定步骤 5.1 样品处理 准确称取样品约0.2 g（精确至0.001 g），置于10 mL具塞比色管中，用甲醇（3.1）定容，混匀，冰浴超声提取15 min，必要时以10000 5.2高效液相色谱参考条件 色谱柱：C18, 250 mm×4.6 mm，5 μ 流动相：甲醇（3.1）+2%冰醋酸溶液（3.3）＝90+10； 流速：1.0 mL/min； 检测波长：355 nm； 柱温：30 进样量：10 μL。 5.3 测定 在5.2色谱条件下，取系列浓度标准工作溶液（3.7）分别进样，进行液相色谱分析，分别以系列浓度标准溶液质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，建立标准曲线，得到回归方程。取待测溶液（5.1）进样10μL分析，色谱图检出的成分，经与该成分的保留时间和紫外光谱图比较确证后，根据待测成分的峰面积，代入回归方程计算待测成分的浓度。按“6”计算样品中维甲酸、异维甲酸的含量。 5.4 平行实验 按以上步骤操作，对同一样品独立进行测定获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 5.5 阳性结果确证 测定过程中若有阳性结果，可采用液相色谱-质谱法进一步确证。 在相同的实验条件下，如果样品中检出的色谱峰的保留时间和紫外光谱图与标准溶液中对应成分一致，所选择的监测离子对的相对丰度比与相当浓度标准溶液的离子相对丰度比的偏差不超过表1规定范围，则可以判定样品中存在对应的待测成分。 表1 阳性结果确证时相对离子丰度比的最大允许偏差 相对离子丰度（k） k≥50% 50%＞k≥20% 20%＞k≥10% k≤10% 最大允许偏差 ±20% ±25% ±30% ±50% 参考条件如下： 色谱条件： 色谱柱：C18, 150 mm×2.1 mm，5 μm； 流速：0.3 mL/min； 柱温：30 ℃ 流动相：甲醇+水＝90+ 10； 进样量：10 μL。 质谱条件： 离子源：电喷雾离子源（ESI源）。 监测模式：负离子监测模式； 离子源电压：-4200V； 检测模式：MS2全扫描，扫描范围（m/z）：50～350； 碰撞电压：-25eV； 去簇电压：-30eV。 表2 待测成分的定性离子对 编号 待测成分 母离子（m/z） 子离子（m/z） 1 维甲酸 299 255 2 异维甲酸 299 255 6 计算 式中：w —— 样品中待测组分的质量分数，%； ρ —— 待测溶液中待测组分的质量浓度，μg/mL； V —— 样品定容体积，mL； m —— 化妆品取样量，g。 7 回收率和精密度 多家实验室验证，维甲酸的平均回收率在87.9%～114.2%之间，相对标准偏差在0.4%～4.2%之间。异维甲酸的平均回收率在87.7%～109.8%之间，相对标准偏差在0.4%～4.2%之间。 8 色谱图 8.1 液相色谱图 色谱峰：（异维甲酸TR=10.788 min，维甲酸Tb=12.616 min） 8.2 总离子图 异维甲酸TR=4.08min，维甲酸Tb=4.76min 8.3 全质谱扫描图